[发明专利]一种检测NKG2C基因型的试剂盒与应用

说明书

本发明公开了一种检测NKG2C基因型的试剂盒与应用。本发明公开的检测NKG2C基因型的试剂盒由检测NKG2C基因型的成套试剂、SsoAdvancedTM Universal SYBR Green Supermix(Bio‑rad公司)、TE缓冲液以及作为标准品的Hela细胞基因组DNA、293T细胞基因组DNA和K562细胞基因组DNA组成，检测NKG2C基因型的成套试剂由名称分别为P1、P2、P3和P4的四条单链DNA组成，P1、P2、P3和P4的序列分别为序列表中序列1‑4。本发明的成套试剂和试剂盒在检测NKG2C基因型时，反应体系稳定，检测方便，准确率高。

技术领域

本发明涉及生物医学领域中，一种检测NKG2C基因型的试剂盒与应用。

背景技术

NK细胞受体是许多种表达在细胞表面的分子结构，调节NK细胞介导的杀伤。其中活化性受体NKG2C属于NKG2受体家族(Ⅱ型C凝集素样整合膜蛋白)，是NK细胞表面的功能性受体，其与DAP-12(二硫键衔接蛋白12)单倍体以非共价键结合，DAP-12携带ITAM(免疫受体酪氨酸依赖性活化基序)，与配体HLA-E结合后活化NK细胞，发挥杀伤靶细胞功能。

NKG2C的表达与NKG2C的基因型相关，NKG2C的基因型有三种，即NKG2C^wt/wt基因型、NKG2C^wt/del基因型和NKG2C^del/del基因型，NKG2C^wt/wt基因型细胞中两条染色体的NKG2C基因均未发生突变，NKG2C^wt/del基因型细胞中一条染色体的NKG2C基因未发生突变而另一条染色体的NKG2C基因发生突变，NKG2C^del/del基因型细胞中两条染色体的NKG2C基因均发生了突变。基因型为NKG2C^wt/wt的健康个体NKG2C⁺NK细胞(即表达NKG2C的NK细胞)占NK细胞的比例远高于其他两种基因型的健康个体，NKG2C^wt/del基因型的健康个体NKG2C⁺NK细胞占NK细胞的比例低于基因型为NKG2C^wt/wt的健康个体，而NKG2C^del/del基因型的健康个体几乎没有NKG2C⁺NK细胞。研究显示，相对于HCMV(人巨细胞病毒)血清反应阴性的健康供者，HCMV血清反应阳性的健康供者中NKG2C⁺NK细胞占NK细胞的比例更高。此外，在接受造血干细胞或实体器官移植的患者中，HCMV感染后NKG2C⁺NK细胞显著增加并持续数月。因此，快捷准确的鉴定造血干细胞移植供者NKG2C基因型，可为研究供者NKG2C基因型与HCMV发生的关系和其他相关研究及临床试验提供极大便利。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何快捷准确的鉴定造血干细胞移植供者NKG2C基因型。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括用于检测NKG2C基因型的成套试剂和SsoAdvancedTM Universal SYBR Green Supermix；

所述成套试剂，由名称分别为P1、P2、P3和P4的四条单链DNA组成，所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的序列分别为序列表中序列1-4。

所述成套试剂中的各单链DNA可独立包装，也可包装在一起。所述成套试剂中所述P1、所述P2、所述P3和所述P4的摩尔比可为4:4:1:1。

所述SsoAdvancedTM Universal SYBR Green Supermix可为Bio-rad公司产品，货号可为1725271。

所述NKG2C基因型可为NKG2C^wt/wt基因型、NKG2C^wt/del基因型和/或NKG2C^del/del基因型。