[发明专利]一种适用于猪的基因改造方法

权利要求书

1.一种适用于猪的基因改造方法，其特征在于，它是将基因编辑工具包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管，待母猪产下小猪，即可获得基因改造猪；所述基因编辑工具包括CRISPR/Cas9基因编辑技术所用到的表达gRNA的基因片段；注射时间是母猪完成交配后24-30h；

所述基因改造为：使猪原有的基因组核酸发生碱基缺失、替换和/或插入。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，当母猪本身无法表达Cas9蛋白时，所述基因编辑工具还包括Cas9基因。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，注射病毒的剂量是（2-6）×10¹¹GC。

4.如权利要求3所述方法，其特征在于，注射病毒的剂量是4.5×10¹¹GC。

5.一种敲除猪的Rag2基因的方法，其特征在于，它是利用权利要求1-4任一所述方法使猪的Rag2基因发生碱基缺失、替换和/或插入，使该基因无法正常表达。

6.如权利要求5所述的敲除猪的Rag2基因的方法，其特征在于，所述gRNA的核酸序列如SEQ ID NO.1或2所示。

7.一种对猪转入外源基因的方法， 其特征在于，它是将所述外源基因包装于3型或6型腺相关病毒，得到重组腺相关病毒，再将重组腺相关病毒注射入母猪输卵管，待母猪产下小猪，即可获得转入外源基因的小猪；注射时间是母猪完成交配后24-30h。

8.如权利要求7所述的对猪转入外源基因的方法，其特征在于，注射病毒的剂量是（2-6）×10¹¹GC。

9.如权利要求8所述的对猪转入外源基因的方法，其特征在于，注射病毒的剂量是4.5×10¹¹GC。