[发明专利]一种用于检测Top2A基因的探针、试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种用于检测Top2A基因的探针、试剂盒及检测方法。本发明提供的探针序列针对基因组非重复区设计，降低了非特异性反应，减少了背景信号；本发明的探针是单链DNA，减少了探针自身的配对，提高了杂交效率；本发明的探针片段小，能够快速的与靶向序列结合，缩短杂交时间。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于检测Top2A基因的探针、试剂盒及检测方法。

背景技术

乳腺癌是妇女中常见的恶性肿瘤之一，近年来，在我国的发病率呈直线上升的趋势。临床研究表明，Top2A基因异常的乳腺癌患者的无复发生存期(Recurrence-freesurvival，RFS)缩短，预后差，尤其是Top2A基因缺失的乳腺癌患者预后更差。Top2A基因异常的患者接受蒽环类药物的化疗方案效果要优于Top2A基因正常的患者。Top2A基因扩增的患者使用环磷酰胺+表阿霉素+氟尿嘧啶(Cyclophosphamide+Epirubicin+Fluorouracil，CEF)方案进行治疗可降低61％的复发风险和51％的死亡风险，而Top2A基因没有扩增的患者使用CEF方案只能降低6％的复发风险和10％的死亡风险。因此，检测乳腺癌患者中Top2A基因的状态有助于判断预后以及指导临床合理用药，对于治疗乳腺癌具有显著帮助。

目前商业化的Top2A基因荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization，FISH)检测探针主要使用细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome，BAC)或者PCR产物经过荧光分子标记后作为探针。由于BAC和PCR产物探针存在一些非特异性序列，使得荧光原位杂交探针的特异性不高，信号背景偏高，并且现有的荧光原位杂交探针的片段通常偏大，使其杂交效率偏低，杂交时间长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测Top2A基因的探针，该探针降低了非特异性反应，减少了背景信号，并且提高了杂交效率，缩短杂交时间。

第一方面，本发明提供一种用于检测Top2A基因的探针，包括Top2A基因特异性探针，所述Top2A基因特异性探针上连接有荧光基团，所述Top2A基因特异性探针序列为SEQID NO.1-SEQ ID NO.26中的任一个或几个。

进一步的，还包括17号染色体特异性探针，所述17号染色体特异性探针上连接有荧光基团，所述17号染色体特异性探针序列为SEQ ID NO.27。

进一步的，所述Top2A基因特异性探针连接的荧光基团为绿色荧光基团，所述17号染色体特异性探针连接的荧光基团为红色荧光基团。

进一步的，所述Top2A基因特异性探针与所述17号染色体特异性探针按照1:1的质量比混合。

第二方面，本发明提供一种用于检测Top2A基因的试剂盒，包括上述第一方面所述的用于检测Top2A基因的探针。

进一步的，所述试剂盒还包含杂交液、缓冲液和复染液。

进一步的，所述缓冲液包括柠檬酸钠缓冲液，所述复染液包括4',6-二脒基-2-苯基吲哚复染液。

第三方面，本发明提供一种Top2A基因的检测方法，使用上述第二方面所述的试剂盒进行，所述检测方法包括：

将待检测样品固定在玻片上；

将所述Top2A基因特异性探针与所述17号染色体特异性探针混匀得到用于检测Top2A基因的探针；

将所述用于检测Top2A基因的探针与所述待检测样品进行核苷酸序列的变性杂交；

所述变性杂交后，对所述玻片进行洗涤；

使用复染液对所述玻片上的杂交区域进行复染；

使用荧光显微镜观察所述玻片的杂交区域。