[发明专利]一种人细小病毒和人博卡病毒双重实时荧光PCR检测引物、探针、试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201910905125.1 | 申请日： | 2019-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN110628946A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 杨海英;岳素文;马寅佳;王雷;李英;张志强 | 申请（专利权）人： | 北京卓诚惠生生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 11470 北京精金石知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘广南 |
| 地址： | 102206 北京市昌*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细小病毒 定量检测 病毒 双重实时荧光PCR检测 生物技术应用 快速定量 临床样本 假阴性 灵敏度 试剂盒 检测 探针 引物 预防 | ||
1.一种人细小病毒和人博卡病毒双重实时荧光PCR引物对和探针组合，其特征在于，所述引物对包括以下序列：
检测人细小病毒的引物对由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示两条序列组成；
检测人博卡病毒的引物对由SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示两条序列组成；
对应的，所述探针包括以下序列：
检测人细小病毒的荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
检测人博卡病毒的荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.根据权利要求1所述引物对和探针组合，其特征在于，还包括检测内对照IAC的引物对和探针，其中检测IAC的引物对和探针具体序列如下：
检测pET28a的引物对由SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示两条序列组成；
检测pET28a的荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
3.根据权利要求1或2所述引物对和探针组合，其特征在于，所述探针5’端的荧光基团为FAM、CY5、VIC或ROX中的一种，3’端的淬灭基团为BHQ1或BHQ2中的一种。
4.一种基于dUTP/UNG的人细小病毒和人博卡病毒双重实时荧光PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任意一项所述引物对和探针组合，以及PCR试剂。
5.根据权利要求4所述试剂盒，其特征在于，所述PCR试剂包括PCR缓冲液、Hot StartDNA Polymerase、UNG酶、dN(U)TP、MgCl2和IAC模板。
6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，所述UNG酶包括UDG酶或UTG酶。
7.一种检测人细小病毒和人博卡病毒的双重实时荧光定量PCR方法，其特征在于，采用权利要求4-6所述试剂盒进行检测。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，其中PCR反应体系具体如下：PCR缓冲液2μL；Hot Start DNAPolymerase 0.2μL；UNG 0.1μL；dN(U)TP 0.16μL；MgCl22.4μL；引物探针混合物2μL，IAC模板1μL，DNA模板5μL，超纯水补至20μL。
9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，所述引物探针混合物中引物浓度为2-8μM，探针浓度为1-3μM。
10.根据权利要求8所述方法，其特征在于，其中PCR反应条件具体如下：50℃2min；95℃5min；95℃15s，55℃45s，循环45次。
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