[发明专利]一种体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法

权利要求书

1.一种体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，步骤是：

(1)以ω-氨基酸为底物，加入ω-氨基酸氧化酶Am-AOX(E.C.1.4.3.6)，黄嘌呤氧化酶XOD(E.C.1.1.3.22)和过氧化氢酶CAT(E.C.1.11.1.6)，建立多酶反应体系，进行纯酶催化反应，得到含二元羧酸的转化液；

(2)将所得的转化液加热使蛋白质变性沉淀，离心去除蛋白质，吸取上清稀释到适于测试的倍数后，用高效液相色谱仪分别测定反应体系中底物和产物的浓度，然后分离、纯化产物得到二元羧酸；

其特征在于：

步骤(1)所述底物ω-氨基酸选4-氨基丁酸、5-氨基戊酸或6-氨基己酸；所述ω-氨基酸氧化酶Am-AOX(E.C.1.4.3.6)来源于马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DMKU3-1042，其因编号为AP012218.1，优化后的ω-氨基酸氧化酶基因核苷酸长度为2034个碱基，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述多酶反应体系中除底物和酶外还含有缓冲液和二价铜离子；所述酶催化反应条件是在37±1℃、pH 7.4±0.2的条件下，水浴摇床150±10转/分钟振荡反应3～30小时；

步骤(2)所述加热的条件是102±1℃煮沸15±2分钟，所述去除蛋白质的离心条件是：14,680±500转/分离心10～15分钟，所述二元羧酸是琥珀酸、戊二酸或己二酸。

2.根据权利要求1所述体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，其特征在于：所述多酶反应体系中底物的浓度为10±2g/L，所述ω-氨基酸氧化酶的用量为0.7～3U/mL，所述黄嘌呤氧化酶的用量为0.7±0.1U/mL，所述过氧化氢酶的用量为120±10U/mL；所述缓冲液的浓度为50mM，所述二价铜离子的浓度为0.04mM。

3.根据权利要求1或2所述体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，其特征在于：所述缓冲液选pH值为7.4的PBS缓冲液；所述二价铜离子选CuSO₄或CuCl₂。

4.根据权利要求1所述体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，其特征在于：步骤(1)中当底物选4-氨基丁酸且底物的浓度为10g/L；所述ω-氨基酸氧化酶的用量为3U/mL，所述黄嘌呤氧化酶的用量为0.7U/mL，所述过氧化氢酶的用量为120U/mL；所述酶催化反应的条件是在37℃、pH 7.4的条件下，水浴摇床150转/分钟振荡反应30小时，得到含琥珀酸的转化液。

5.根据权利要求1所述体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，其特征在于：步骤(1)中当底物选5-氨基戊酸且底物的浓度为10g/L；所述ω-氨基酸氧化酶的用量为1U/mL，所述黄嘌呤氧化酶的用量为0.7U/mL，所述过氧化氢酶的用量为120U/mL；所述酶催化反应的条件是在37℃、pH 7.4的条件下，水浴摇床150转/分钟振荡反应30小时，得到含戊二酸的转化液。

6.根据权利要求1所述体外催化ω-氨基酸生产二元羧酸的方法，其特征在于：步骤(1)中当底物选6-氨基己酸且底物的浓度为10g/L；所述ω-氨基酸氧化酶的用量为0.7U/mL，所述黄嘌呤氧化酶的用量为0.7U/mL，所述过氧化氢酶的用量为120U/mL；所述酶催化反应的条件是在37℃、pH 7.4的条件下，水浴摇床150转/分钟振荡反应30小时，得到含己二酸的转化液。