[发明专利]一种快速测定人血浆中帕罗西汀血药浓度的方法

权利要求书

1.一种采用较少血浆用量，快速测定人血浆中帕罗西汀血药浓度的UPLC-MS/MS方法，其特征在于，包括如下步骤：

配制帕罗西汀标准溶液、配制内标帕罗西汀-d4内标溶液，建立标准曲线；

测定血浆中帕罗西汀的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）建立标准曲线

a配制标准溶液：

精密称取盐酸帕罗西汀标准品适量置于量瓶中，加二甲基亚砜溶解并定容至刻度；再用60%甲醇水溶液进行逐级稀释，得到一系列标准品溶液；

精密称取盐酸帕罗西汀-d4标准品适量置于量瓶中，加二甲基亚砜溶解并定容至刻度；再用稀释剂稀释至10-100ng/mL，作为内标工作溶液；

b建立标准曲线

分别取一系列浓度的帕罗西汀标准溶液，分别加入到空白血浆中，涡旋混匀，加入内标工作溶液，进行样品前处理，进行UPLC-MS/MS分析，以一系列浓度帕罗西汀的峰面积与内标峰面积比作Y为纵坐标，以帕罗西汀系列浓度作为横坐标进行最小二乘法线性回归，建立标准曲线；

（2）样品检测：待样品经过前处理后，进行UPLC-MS/MS分析。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述前处理方法为：取血浆样品适量，加入内标适量后，涡旋混匀，加入5~10倍体积的乙酸乙酯，涡旋提取；

离心，取上清200-800μL，氮气吹干，使用含有甲酸的甲醇水溶液150μL-300μL复溶，即为供试品溶液，用于UPLC-MS/MS进样分析。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，步骤（1）中，内标工作溶液的稀释剂为甲醇水溶液，建立帕罗西汀的标准曲线范围为0.05~40 ng/mL。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，取用样品血浆体积为90~200μL。

6.根据权力要求3所述方法，其特征在于，所述涡旋混匀时间为10~30秒，涡旋提取时间为4~12分钟，所述离心条件为8000~12000 rpm/分钟；离心温度为2~8℃；离心时间为5~10分钟。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述UPLC-MS/MS分析的液质条件如下：

色谱条件：流动相A为甲酸水溶液，流动相B为甲醇；

梯度洗脱，初始流动相A比例为30%-50%（优选40%）；

流速为0.25~0.5 mL/min，柱温为20~40℃，进样室温度为4-15℃；

质谱条件：离子喷射电压：1500 V；脱溶剂气温度：600 ºC；脱溶剂气流速：1000L/h；锥孔气流速：150L/h；载气压力：7.0Bar；离子源为ESI，扫描方式为多离子反应监测（MRM）方式。

8.根据权利要求7所述的色谱条件，其特征在于，流动相A中甲酸的含量为0.1%。