[发明专利]原位消解土壤大环内酯类抗生素污染的复合制剂及制备方法与应用

权利要求书

1.一种原位消解土壤大环内酯类抗生素污染的复合制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将营养载体、吸附载体和表面活性剂混合均匀，进行除菌处理，得到耦合载体；

（2）在除菌后的耦合载体中接入大环内酯类抗生素降解菌液、能量供给菌菌液和磁介质菌菌液，得到混合物I；发酵，得到原位消解土壤大环内酯类抗生素污染的复合制剂；

所述的营养载体的组成按质量百分比计，如下：氨基酸粉4～12%、糖蜜粉8～14%、蛋白胨5～9%、酵母提取物2～4%、骨粉4～8%、稻壳60～65%；

所述的吸附载体的组成按质量百分比计，如下：磁铁矿粉8～16%、Fe₃O₄磁性纳米颗粒12%、Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米复合粒子0～7%、麦饭石粉25～35%、硅藻土粉25～26%、生物碳15～25%；或如下：磁铁矿粉8～16%、Fe₃O₄磁性纳米颗粒0～12%、Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米复合粒子7%、麦饭石粉25～35%、硅藻土粉25～26%、生物碳15～25%；

所述的表面活性剂为聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、辛基酚聚氧乙烯醚、十二烷基苯磺酸与2-氨基乙醇的1:1型化合物、椰子油脂肪酸二乙醇酰胺、十二烷基硫酸钠中的一种或至少两种；

所述的混合物I中各成分的组成按质量百分比计，如下：菌体浓度为1.2×10¹²cfu/mL的大环内酯类抗生素降解菌菌液10～15％、菌体浓度为1×10¹²cfu/mL的能量供给菌菌液4～8％、菌体浓度为1×10¹²cfu/mL的磁介质菌菌液5～10％、营养载体49～65％、吸附载体10～20％、表面活性剂5～7％；

所述的大环内酯类抗生素降解菌选自以下任一组合：

1）洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）GB-01、洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）ATCC 17759、越南伯克霍尔德氏菌（Burkholderia vietnamiensis）TS1、越南伯克霍尔德氏菌（Burkholderia vietnamiensis）ATCC BAA-248、假单胞菌（Pseudomonas sp.）C3、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）Ery-E、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）CICC 10368、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putda）ACCC 10081、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）XP12、无丙二酸柠檬酸杆菌（Citrobacter amalonaticus）FY、蜡样芽孢杆菌（Bacillaceae cereus）AVM1、蜡样芽孢杆菌（Bacillaceae cereus）G10、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtlis）G1、苍白杆菌（Ochrobactrum haematophilum）AW1-12、人苍白杆菌（Ochrobactrum anthropi）CICC 20697；

2）洋葱伯克霍尔德菌ATCC 17759、假单胞菌C3、恶臭假单胞菌CICC 10368、无丙二酸柠檬酸杆菌FY、人苍白杆菌CICC 20697；

3）经红霉素驯化后的假单胞菌C3、恶臭假单胞菌CICC 10368、无丙二酸柠檬酸杆菌FY、人苍白杆菌CICC 20697；

4）经泰乐菌素驯化后的越南伯克霍尔德氏菌TS1、越南伯克霍尔德氏菌ATCC BAA-248、假单胞菌C3、恶臭假单胞菌Ery-E、恶臭假单胞菌XP12、无丙二酸柠檬酸杆菌FY、蜡样芽孢杆菌G10、枯草芽孢杆菌G1、人苍白杆菌CICC 20697；

5）经阿奇霉素驯化后的洋葱伯克霍尔德菌ATCC 17759、越南伯克霍尔德氏菌TS1、恶臭假单胞菌ACCC 10081、蜡样芽孢杆菌AVM1、蜡样芽孢杆菌G10、枯草芽孢杆菌G1、苍白杆菌AW1-12；

所述的能量供给菌为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）ACCC 10628和产氨短杆菌（Brevibacterium ammoniagenes）ACCC 04259，或是枯草芽胞杆菌ACCC 10628、产氨短杆菌ACCC 04259和产氨短杆菌SCTCC 100664，或是枯草芽胞杆菌ACCC 10628、产氨短杆菌ACCC04259、产氨棒杆菌（Corynebacterium ammoniagenes） ACCC 10158、短小芽胞杆菌（Bacilluspumilus）ACCC10387和产氨短杆菌（Brevibacteriumammoniagenes）SCTCC100664，或是枯草芽胞杆菌ACCC 10628和产氨棒杆菌ACCC 10158，或是枯草芽胞杆菌ACCC10628、产氨棒杆菌ACCC 10158和产氨短杆菌SCTCC 100664；

所述的磁介质菌为副球菌（Paracoccus sphaerophysae）ACCC 05413和鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas yabuuchiae）ACCC 19937，或是副球菌ACCC 05413、鞘氨醇单胞菌ACCC19937、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）CICC 23919和洋葱伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cepacia）CICC 10828，或是鞘氨醇单胞菌ACCC 19937、荧光假单胞菌CICC23919和洋葱伯克霍尔德氏菌CICC 10828，或是副球菌ACCC 05413、鞘氨醇单胞菌ACCC19937和荧光假单胞菌CICC 23919。