[发明专利]一种利用生物传感器筛选精氨酸高产菌株的方法

说明书

本发明公开了一种利用生物传感器筛选精氨酸高产菌株的方法，属于生物技术领域。本发明提供了一种可用于筛选精氨酸高产菌株的生物传感器，此生物传感器含有编码阻遏蛋白的基因argR、编码启动子的基因PargC以及标记基因sacB，使用此生物传感器筛选精氨酸高产菌株具有操作简单、检测周期短、检测效率高的优势。

技术领域

本发明涉及一种利用生物传感器筛选精氨酸高产菌株的方法，属于生物技术领域。

背景技术

精氨酸是人体必需的一种氨基酸，存在于多种动物类食物中。有研究表明，精氨酸是生物体尿素循环的重要中间代谢产物，是肌体合成细胞浆蛋白和核蛋白的重要物质，还是天门冬氨酸、谷氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、聚胺(腐胺、精胺)等转换为高能磷酸化合物磷酸肌酸的中间体，具有独特的生理和药理作用，因此，其在食品、医药和化妆品等领域有十分广泛的用途。

目前，工业上常通过微生物发酵法生产精氨酸，已被报道的精氨酸生产菌株则主要有钝齿棒状杆菌、谷氨酸棒状杆菌、大肠杆菌、酿酒酵母、黄色短杆菌等。虽然已被报道的部分精氨酸生产菌株已经具备了较为优良的发酵性能，但是，鉴于精氨酸重要的应用价值和巨大的市场需求，寻求发酵性能更为优良的精氨酸生产菌株仍然是所有研究开发工作的基础，更是各精氨酸生产厂家增加自身市场竞争力的重中之重。

现有的筛选精氨酸高产菌株的方法主要是先对精氨酸生产菌株进行多轮随机诱变，然后将诱变得到的菌株进行培养，最后通过坂口试剂法或高效液相色谱法测定每一个诱变菌株培养获得的发酵上清液中精氨酸的含量，由于坂口试剂法或高效液相色谱法需要复杂的样品处理，检测周期也比较长，不能够实现发酵液中精氨酸含量的快速检测，这使得整个筛选过程劳动密集且耗时。因此，急需找到一种效率更高的筛选精氨酸高产菌株的方法以克服现有筛选方法的缺陷。

发明内容

[技术问题]

本发明要解决的技术问题是提供一种效率更高的筛选精氨酸高产菌株的方法。

[技术方案]

为解决本发明的技术问题，一种生物传感器，所述生物传感器是携带编码阻遏蛋白的基因argR、编码启动子的基因PargC以及标记基因sacB的载体。

在本发明的一种实施方式中，所述载体为质粒pDXW-10。

在本发明的一种实施方式中，所述编码阻遏蛋白的基因argR的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

在本发明的一种实施方式中，所述编码启动子的基因PargC的核苷酸序列如SEQID No.2所示。

在本发明的一种实施方式中，所述标记基因sacB的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

在本发明的一种实施方式中，所述标记基因sacB位于编码启动子的基因PargC的上游以及编码阻遏蛋白的基因argR的下游。

在本发明的一种实施方式中，所述编码阻遏蛋白的基因argR位于质粒pDXW-10自带的编码启动子tac-M的基因的下游。

本发明还提供了一种重组菌株，所述重组菌株含有上述生物传感器。

在本发明的一种实施方式中，所述重组菌株以精氨酸生产菌株为宿主。

本发明还提供了一种筛选精氨酸高产菌株的方法，所述方法为先将上述重组菌株接种至含有蔗糖的液体培养基中进行培养，得到培养液，然后检测培养液中的OD₆₀₀值，OD₆₀₀值相对高的培养液所对应的诱变菌株即为精氨酸生产能力相对强的诱变菌株；或者，所述方法为先将上述重组菌株接种至含有蔗糖的固体培养基上进行培养至菌落长出，菌落相对大的诱变菌株即为精氨酸生产能力相对强的诱变菌株。