[发明专利]番茄遗传转化体系的构建方法在审
| 申请号： | 201910888114.7 | 申请日： | 2019-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN110521603A | 公开（公告）日： | 2019-12-03 |
| 发明（设计）人： | 张永夏;邓因娇;赵盼盼;陈嘉雯;储玉凤;黄腾波 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00;A01H1/06 |
| 代理公司： | 11330 北京市立方律师事务所 | 代理人： | 刘延喜<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番茄子叶 培养基 预培养 再生苗 遗传转化体系 农杆菌侵染 番茄 诱导 生根 转基因番茄植株 生长素 分化培养基 培养基配方 生根培养基 愈伤组织 育苗周期 不定芽 玉米素 构建 侵染 无菌 申请 筛选 移植 分化 | ||
1.一种番茄遗传转化体系的构建方法,其特征在于,其包括以下步骤:
获取无菌的番茄子叶；
利用农杆菌侵染所述番茄子叶，其中，所述番茄子叶先在第一培养基上预培养1d；农杆菌侵染之后，将所述番茄子叶置于所述第一培养基上共培养1d；所述第一培养基在1/2MS培养基的基础上还包括2mg/L玉米素和0.5mg/L生长素；
利用分化培养基诱导侵染后的番茄子叶依次分化愈伤组织和不定芽，以获得再生苗；
利用生根培养基诱导所述再生苗生根；
移植生根的再生苗到土中，以获得转基因番茄植株。
2.如权利要求1所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，所述获取无菌的番茄子叶的步骤为：
获取番茄种子，利用4％次氯酸钠在转速为120rpm的条件下消毒15min；
无菌水洗涤消毒后的番茄种子之后，继续在摇床上孵育至发芽；
将发芽的番茄种子播种到1/2MS培养基上，光下培养至番茄子叶展开；
收获无菌的番茄子叶。
3.如权利要求1所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，侵染所述番茄子叶之前，将所述番茄子叶切成0.5cm2的小块。
4.如权利要求1所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，预培养时，所述番茄子叶正面朝下置于所述第一培养基上。
5.如权利要求4所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，预培养和共培养的过程，分别在避光的28℃的条件下进行。
6.如权利要求4所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，农杆菌侵染过程中，所述农杆菌的浓度对应于该农杆菌在600nm波长处的吸光值达到0.5～0.8的范围内；侵染时间为15min。
7.如权利要求1所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，所述分化培养基在1/2MS培养基的基础上还包括2mg/L玉米素、0.5mg/L生长素、250mg/L羧苄青霉素钠和50mg/L卡那霉素。
8.如权利要求7所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，所述分化培养基需10～15d更换一次，直至所述番茄子叶分化再生苗。
9.如权利要求1所述的番茄遗传转化体系的构建方法，其特征在于，所述生根培养基在1/2MS培养基的基础上还包括0.1mg/L生长素、250mg/L羧苄青霉素钠和50mg/L卡那霉素。
10.如权利要求1所述的番茄遗传转化体系的构建方法在构建浆果模式植物中的应用，或者在构建果实型生物反应器中的应用。
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