[发明专利]一种磁微粒与抗原偶联的方法

说明书

本发明涉及生物技术检测领域，尤其涉及一种磁微粒与抗原偶联的方法，包括(1)抗原的前处理；(2)磁微粒的前处理；(3)磁微粒的活化；(4)偶联抗原；(5)偶联产物的洗涤；(6)偶联产物的储存。采用本发明的方法可防止磁微粒与抗原偶联时出现团聚现象，大大提高了磁微粒与抗原的偶联效率。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，尤其涉及一种磁微粒与抗原偶联的方法。

背景技术

磁微粒具有超顺磁性、较高的比表面积、可修饰功能性官能团、稳定性与分散性良好等特点。磁微粒的表面修饰有官能团，在合适缓冲溶液条件下，该官能团与抗原分子发生偶联，即完成了抗原分子的固定化。后续在外磁场的控制下，通过免疫反应、洗涤、测定等步骤，可以快速地测得目标分子的浓度或含量。

目前磁微粒上修饰的官能团主要有甲苯磺酰基、羧基、氨基和羟基等，鉴于抗原分子与磁微粒偶联时的反应效率和磁微粒修饰官能团的工艺成熟度，修饰羧基官能团的磁微粒应用较多。然而抗原分子结构复杂，分子量较小，现有技术中某些抗原分子在与磁微粒偶联的过程中容易导致磁微粒之间发生团聚，进而影响到磁微粒和抗原的偶联，降低了偶联效率，进而影响了试剂盒的检测性能。因此针对上述问题，有必要建立一种磁微粒与抗原偶联的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术的不足，提供一种磁微粒与抗原偶联的方法，该方法可以防止磁微粒与抗原偶联时磁微粒之间发生团聚，提高磁微粒与抗原的偶联效率。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种磁微粒与抗原偶联的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)抗原的前处理：取抗原溶液，加入2-吗啉乙磺酸缓冲液稀释，再加入Triton-X100混匀，备用；

(2)磁微粒的前处理：取磁微粒混悬液，磁分离去除上清液后加入2-吗啉乙磺酸缓冲液，室温下混匀；

(3)磁微粒的活化：向步骤(2)中加入新配制的碳二亚胺溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液，室温下混匀，控制活化时间，得到活化后的磁微粒混悬液；

(4)偶联抗原：取步骤(3)中活化后的磁微粒混悬液，磁分离去除上清液后，加入2-吗啉乙磺酸缓冲液，加入步骤(1)中备用的抗原溶液，室温下混匀，得到偶联有抗原的磁微粒溶液；

(5)偶联产物的洗涤：取步骤(4)中偶联有抗原的磁微粒溶液，磁分离去除上清液后，加入洗涤液，室温下混匀；

(6)偶联产物的储存：取步骤(5)中经过洗涤液处理后偶联有抗原的磁微粒溶液，磁分离去除上清液后，加入储存液，室温下混匀，2-8℃储存。

作为一种改进的技术方案，所述的抗原为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。

作为一种改进的技术方案，步骤(1)中所述Triton-X100的加入量为所述抗原溶液的0.1％-5.0％v/v，混匀温度为20-37℃，混匀时间为10-40min。

作为一种改进的技术方案，步骤(2)中所述磁微粒混悬液中的磁微粒为表面带有羧基的磁微粒，所述磁微粒的粒径为0.1-5um。

作为一种改进的技术方案，所述步骤(1)、步骤(2)和步骤(4)中，所述2-吗啉乙磺酸缓冲液的浓度为10-100mmoL/L，pH为4-6。

作为一种改进的技术方案，步骤(3)中所述碳二亚胺溶液的浓度为5-10mg/mL，所述N-羟基琥珀酰亚胺溶液的浓度为5-10mg/mL，且活化时加入的所述碳二亚胺溶液与所述N-羟基琥珀酰亚胺溶液的摩尔比为0.5-2。

作为一种改进的技术方案，步骤(4)中磁微粒混悬液和抗原溶液混匀的反应溶液中磁微粒和抗原的质量比为100:1-10:1，偶联时间为1-4h，温度为20-37℃。