[发明专利]一种肝癌动物模型的制备方法

说明书

本发明提供一种肝癌动物模型的制备方法，包括以下具体步骤：（1）选取4周龄的ICR小鼠，观察饲养2周；将HepG2细胞在加有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养传代扩增后用注射器注射入ICR小鼠腹腔；（2）待小鼠出现明显腹水后抽出腹水2mL，加入离心管内，离心，弃上清；加入5mL PBS溶液重悬、吹洗，再离心5分钟，弃上清；（3）用PBS溶液以步骤（2）中同样的方法重复洗2‑3遍；（4）在步骤（3）中弃上清后的沉淀内加入5mL PBS溶液吹散细胞，离心3分钟；用精密移液器将上清和沉淀上层的红细胞取出，保留下层白色沉淀；本发明制备的原发性肝癌小鼠模型的效果大大优于目前已有的原发性肝癌动物模型建立方法，较已有模型具有更加真实性、实用性、方便性、经济性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肝癌动物模型的制备方法。

背景技术

原发性肝癌是一种世界范围内恶名昭彰的癌症，以其晚发现，高死亡率而位于癌症致死率排名前列，占每年全球新增和死亡患者的54%。由于我国饮食习惯和人群易感性导致了国人肝炎高发，如果治疗不及时往往会诱发肝癌。人群的异质性、普遍的临床研究抵触情绪以及科学伦理审查的限制让临床肝癌研究诸多掣肘。因而，广大科学工作者致力于开发优良的动物模型来替代人类进行肝癌研究，并取得了诸多成果。但现存的肝癌动物模型或多或少存在着各种不足和限制，故本项目通过多年探索和改进，建立了一种新的有效的肝癌小鼠模型的构建方法。

现今采用较多的肝癌模型依据成因分为自发性、诱发性、移植性和基因修饰动物模型。自发性优点良多且符合临床病程及病理特征，但该类模型发生率低下且时间参差不齐，产生肿瘤部位以及肿瘤性状个体间差异较大，因而难以大规模应用，维持成本畸高；时下较为流行的做法是采用诱发手段产生肝癌模型，多用化学试剂诱导，如CCl4、DEN。此类试剂剧毒致癌且有挥发性，对实验者健康存在威胁。此外，此法诱导时程较长，平均9个月左右，且造模对象基数庞大，维持耗费巨大，然成模之后个体差异也十分显著，如成瘤时间、肿瘤大小、荷瘤病灶等；基因修饰肝癌动物模型制作技术要求高，价格昂贵，普通实验室无力承担，且存在着基因修饰后代偿效应而导致的成模失败的风险；移植性肿瘤模型是一种简易快捷且周期短、成瘤快的造模选择。裸鼠为移植性肝癌模型首选实验动物，但其价格高、难饲养、易被污染的不足也是研究者无法忽视的，此外，其免疫缺陷的特性也给研究结果外推增加了困难，降低了比较医学研究价值。已有报道表明用Walker-256细胞行大鼠肝内注射能够复现人肝癌的膨胀性和浸润性生长方式，但该细胞系甲胎蛋白（AFP）阴性，不同于人类肝癌，且大鼠操作难度大，占用饲养资源多、价格也相对较高。很多研究者偏爱用肿瘤组织块接种方式造模，这种方法也存在一定的不足，其一是肿瘤组织块构成复杂，并不完全是单一的肿瘤细胞，常混有其他组织。其二是肝内瘤块包埋，伤口大、出血多、对手术要求高，并且移植量较难控制。

目前已存在的各种肝癌动物模型都有一定的缺陷，无法满足目前生物医药领域的需求，因而寻求一种新的肝癌造模方式是十分必要的。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种肝癌动物模型的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种肝癌动物模型的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

（1）选取4周龄的ICR小鼠，观察饲养2周；将HepG2细胞在加有10％胎牛血清的DMEM培养基中培养传代扩增后，PBS洗涤2~3次后，400μL PBS重悬后用注射器注射入ICR小鼠腹腔；

（2）待小鼠出现明显腹水后抽出腹水2mL，加入离心管内，离心，弃上清；加入5mL PBS溶液重悬、吹洗，再离心5分钟，弃上清；

（3）用PBS溶液以步骤（2）中同样的方法重复洗2-3遍；

（4）在步骤（3）中弃上清后的沉淀内加入5mL PBS溶液吹散细胞，离心3分钟；用精密移液器将上清和沉淀上层的红细胞取出，保留下层白色沉淀；