[发明专利]一种具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法

权利要求书

1.一种具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、牡蛎浆液的制备：取牡蛎肉，按料液重量比1:3～1:5加水，0～4℃、4000～5000rpm匀浆，每次匀浆时间为1～2min，间歇时间为30～40s，总共匀浆3～5次，得牡蛎浆液；

S2、牡蛎浆液的一次酶解：将步骤S1所述牡蛎浆液的pH调节到2.0～4.0，加入胃蛋白酶，在30～37℃搅拌1～2小时，得酶解液A；其中，所述胃蛋白酶的添加量以所述牡蛎浆液中蛋白质的总含量为基准，每克蛋白质添加胃蛋白酶3000～3500U；

S3、牡蛎浆液的二次酶解：将步骤S2所述酶解液A的pH调节到6.5～8.2，加入胰酶，在30～37℃搅拌3～4小时，得酶解液B；将所述酶解液B离心，取上清液A进行干燥，所得粉末即为牡蛎多肽；其中，所述胰酶的添加量以所述酶解液A中蛋白质的总含量为基准，每克蛋白质添加胰酶3000～3500U；所述干燥为喷雾干燥或冷冻干燥。

2.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，步骤S2所述搅拌的转速为45～60rpm。

3.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述搅拌的转速为45～60rpm。

4.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述离心的具体参数为：10000～12000g、8～10min。

5.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述冷冻干燥参数为：第一段：-60℃～-50℃冷冻3～5小时，第二段：-45℃～-40℃冷冻1～3小时，第三段：-30℃～-25℃冷冻1～2小时，第四段：-10℃～-5℃冷冻1～2小时，第五段：5℃～15℃干燥1～2小时，第六段：15℃～20℃干燥1～2小时，第七段：20℃～25℃干燥24～48小时；在第二段进行抽真空，所述第二段至第七段的真空度为18～22Pa；真空泵启动温度为-60℃～-50℃，隔板温度为-30℃～-20℃。

6.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述喷雾干燥为常压喷雾干燥：喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为30％～40％，设置进风温度150～220℃，物料温度控制在60～90℃。

7.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，步骤S3所述喷雾干燥为低温喷雾干燥：低温喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为15％～40％，真空度达到-0.01～-0.06MPa，进风温度为95～145℃，物料温度控制在30～60℃。

8.根据权利要求1所述具有成骨活性的牡蛎多肽的制备方法，其特征在于，包括步骤：

S1、牡蛎浆液的制备：取牡蛎肉100g，加水300g，0℃、5000rpm匀浆，每次匀浆时间为1min，间歇时间为30s，总共匀浆5次，得牡蛎浆液400g；

S2、牡蛎浆液的一次酶解：取步骤S1所述牡蛎浆液400ml，使用4mol/L的HCl将所述牡蛎浆液的pH调节到2.0，加入胃蛋白酶，在37℃、55rpm搅拌2小时，得酶解液A 400ml；其中，所述牡蛎浆液中蛋白质总含量为30g，每克蛋白质添加胃蛋白酶3000U，共添加胃蛋白酶90000U；

S3、牡蛎浆液的二次酶解：使用4mol/L的NaOH将步骤S2所述酶解液A的pH调节到8.0，加入胰酶，在37℃、55rpm搅拌3小时，得酶解液B；将所述酶解液B在10000g离心10min，取上清冷冻干燥或喷雾干燥，干燥所得粉末即为牡蛎多肽；

其中，所述酶解液A中的蛋白质总含量为30g，每克蛋白质添加胰酶3000U，共添加90000U；

所述冷冻干燥的时间-温度程序设置如下，第一段：-60℃冷冻3小时，第二段：-45℃冷冻2小时，第三段：-30℃冷冻2小时，第四段：-10℃冷冻2小时，第五段：15℃干燥1小时，第六段：20℃干燥1小时，第七段：25℃干燥48小时；在第二段抽真空，所述第二段至第七段真空度为18～22Pa；真空泵启动温度为-60℃，隔板温度设定为-30℃；

所述喷雾干燥为常压喷雾干燥或低温喷雾干燥，

所述常压喷雾干燥：喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为40％，设置进风温度200℃，物料温度控制在80℃；

所述低温喷雾干燥：低温喷雾干燥控制溶液中的固形物质量含量范围为35％，真空度达到-0.01～-0.06MPa，进风温度为115℃，物料温度控制在55℃。