[发明专利]一种白细胞抗原B27检测方法及其应用

权利要求书

1.一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：具体步骤如下：

步骤一：试剂准备

1640营养剂 HLA-B27标准血清盘 补体 淋巴细胞分离液肝素；

步骤二：在试管一中添加肝素0.5ml，然后再将试管一中加入采集的新鲜血液2.0ml，待肝素和血液加入之后，将试管一内部的肝素和血液摇匀，等待摇匀之后再将试管静置；

步骤三：在步骤二中的试管一中继续添加淋巴细胞分离液2ml；

步骤四：通过试管二取用抗凝血，并在试管试管二加入等量的1640营养液，待加入1640营养液之后将试管二震荡摇匀，摇匀之后将试管二中的液体缓慢的铺设于试管一淋巴细胞分离液的表面，最终再进行离心并静置；

步骤五：选取白细胞层，并将白细胞层放入试管三中，与此同时试管三中也会加入8ml的1640营养液，之后再将试三中的液体摇匀并离心；

步骤六：去掉上清液，将细胞震荡起来，之后再加入8ml的1640营养液，待1640营养液加入之后混匀并离心；

步骤七：去掉上清液，再将细胞震荡起来，之后加入1640营养液并将溶液调至1000个/ul；

步骤八：取HLA-B27标准血清盘一块，并在室温下进行融化，加入无菌水，将调至好的淋巴细胞悬液进行混匀；

步骤九：加入补体5ul，且放置在室温下孵育一段时间，之后再加入2％薯红3ul，最后将HLA-B27标准血清盘放入在冰箱中进行冷藏，且冷藏的温度为4摄氏度，待第二天后通过显微镜观察。

2.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：所述步骤二和步骤五中的摇匀方式可采用振荡器，振荡器的震动幅度应调节至中档，无需振荡器的震动幅度过大。

3.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：所述步骤二中试管的静置时间为20分钟。

4.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：步骤三中在添加淋巴细胞分离液时，需要保证在无菌的室内，且在添加的过程中保证淋巴细胞分离液随着试管一的内部流入至其内部。

5.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：所述步骤四中的离心方式主要采用微型离心机，离心机的转数为2000r/min，离心机的工作时间为20分钟，待试管二中的液体被离心之后，离心机要保证慢停状态。

6.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：所述步骤五中的离心方式主要采用微型离心机，离心机的转数为800r/min，离心机的工作时间为8分钟。

7.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：所述步骤六中的离心方式主要采用微型离心机，离心机的转数为1500r/min，离心机的工作时间为5分钟。

8.根据权利要求1所述的一种白细胞抗原B27检测方法，其特征在于：所述步骤九中补体的孵育时间为2小时。

9.一种白细胞抗原B27检测方法的应用，其特征在于：该检测方法应用于检测微量B27抗原。