[发明专利]一种长眼表停留和高角膜渗透载药纳米胶束制备方法

说明书

一种长眼表停留和高角膜渗透载药纳米胶束制备方法，利用眼表具有带负黏蛋白层的性质，通过在纳米胶束表面嫁接多肽，由于多肽具有两性解离的性质，通过多肽设计，使其在泪液环境中呈现带正电的性质，从而增加纳米粒子与眼表组织的相互作用，增加药物的眼表停留及角膜穿透，该药物载体能够包载不同疏水性药物后，用于不用眼表和眼内疾病的治疗。

技术领域

本发明具体涉及眼用药物技术领域，具体涉及一种长眼表停留和高角膜渗透载药纳米胶束制备方法。

背景技术

生物利用度低是临床上眼表用药普遍存在的关键问题。眼球是相对独立组织，有着明显区别于其它部位结构和微环境特性，和较特殊的药物传递和代谢途径，因而给眼部用药带来区别与其他部位的独特挑战：1）存在血眼屏障，难以用全身给药达到治疗浓度；2）眼球免疫豁免特性，创伤性局部给药容易产生眼内感染；3）存在眼表结构屏障（相对封闭的多层膜结构）和生理屏障（如眨眼等生理性活动），非创伤性眼表给药方式生物利用度低。眼部疾病如干眼、葡萄膜炎、眼内肿瘤、青光眼、糖尿病视网膜病变、老年性黄斑病变等，往往需要长期、多次反复给药，造成眼部用药患者依存性差，给患者工作和生活带来较大的困扰。因此，设计基于眼部结构和生理特性的药物递送策略，提高药物的生物利用度和靶向性，在眼表和眼内疾病的治疗中显得尤为关键。

眼表结构和生理屏障是眼表用药生物利用度低的关键因素。传统的局部给药（如玻璃体注射或眼周注射等）容易造成视网膜脱离、眼内感染、玻璃体内出血、眼压升高等。眼表给药（如滴眼液）作为一种非创伤性、便捷的给药方式，在临床上广泛使用。研究表明，传统滴眼液的给药方式仅有1-3 %的药物能够到达眼内组织，大部分的药物通过鼻泪管排出，既造成药物的浪费，也存在产生次生伤害的风险。我们认为至少存在以下三种相互区别又相互联系的因素限制了药物的功效：1）眼球多层次膜封闭的结构特征限制了药物进入眼内；2）泪液循环、眨眼等正常生理活动使药物迅速排出，降低药物与眼表接触时间，进而影响药物角膜透过性；3）疏水药物眼表滞留时间短、泪液溶解度小进一步造成药物生物利用度低。疏水性药物如FK506（tacrolimus，常译作他克莫司）、地塞米松、环孢菌素等是眼部常用药物，直接使用生物利用度低。疏水性药物载泪液中溶解度低，通常以混悬液（小颗粒）形式存在，导致药物分子与眼表接触和相互作用的比表面积降低，进而影响眼表滞留时间和角膜穿透性能。因此，增加药物在泪液中的溶解度，增强药物与眼表组织的相互作用，能够延长药物眼表滞留时间，从而增加眼表用药的生物利用度。

发明内容

为了解决现有技术存在的技术缺陷，延长药物眼表滞留时间，从而增加眼表用药的生物利用度，本发明提供了一种长眼表停留和高角膜渗透载药纳米胶束制备方法。

本发明采用的技术解决方案是：一种长眼表停留和高角膜渗透载药纳米胶束制备方法，通过以下步骤制备：

（1）PEG-PBA 两亲共聚物制备：称取600 mg γ-苄基-L-谷氨酸-N-羧酸内酸酐溶于10mL无水 N, N-二甲基甲酰胺（DMF）中，并置于圆底烧瓶内，室温下磁力搅拌，并通氮气。将500 mg两端分别为羧基和氨基的聚乙二醇（HOOC-PEG-NH2）溶于5 mL氯仿中，通氮气10min 后，加入上述圆底烧瓶内,磁力搅拌下 37 ℃反应24 h，乙醚沉淀，并过滤后，将沉淀用DMF复溶，用透析袋透析48 h去除小分子反应副产物，并冷冻干燥得固体产物HOOC-PEG-PBG；

（2）PEG-PBA功能化修饰：取HOOC-PEG-PBG与多肽（HKHKHK）在烧杯中溶于26 mLDMF中，加入催化剂NHS与EDC开始反应，室温下磁力搅拌24 h，产物中加入2 mL哌啶，室温下继续搅拌1 h，加入1.8mL冰醋酸终止反应，乙醚洗涤沉淀并过滤后，产物溶于10 mL DMF,使用透析袋透析所得混合物，冷冻干燥即可得固体PEP-PEG-PBG；

（3）共自组装纳米粒子制备：将PEP-PEG-PBG与HOOC-PEG-PBG以1mg/mL浓度分别溶于DMF，混匀后在超纯水中透析后得到所述的长眼表停留和高角膜渗透载药纳米胶束。