[发明专利]一种脐带间充质干细胞的分离培养方法在审
| 申请号： | 201910881502.2 | 申请日： | 2019-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN110577929A | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | 张鹏成 | 申请（专利权）人： | 安徽科门生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 34119 合肥市长远专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 刘勇 |
| 地址： | 230000 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 组织块 脐带间充质干细胞 脐带基质 上清液 细胞 消化 传代 胶原蛋白酶 分离培养 接种培养 增殖活性 处理液 融合度 扩增 脐带 去除 体外 小块 剔除 清洗 损伤 残留 老化 采集 血管 | ||
1.一种脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、采集脐带，剔除血管后清洗干净，获得脐带基质；
S2、将脐带基质剪成小块，加入胶原蛋白酶液消化15-20min，然后终止消化；
S3、离心，弃去上清液，向残留的组织块中加入组织块处理液，处理3-5min后再次离心，弃去上清液，获得待培养组织块；
所述组织块处理液包括下述原料：聚乙二醇，鼠李糖脂，泊洛沙姆188，PBS溶液；
S4、将待培养组织块进行接种培养，待细胞达到80-90％融合度时去除组织块，消化、传代，得到脐带间充质干细胞。
2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述组织块处理液包括下述质量百分比的原料：聚乙二醇0.01-0.02％，鼠李糖脂0.01-0.02％，泊洛沙姆188 0.05-0.1％，余量为PBS溶液。
3.根据权利要求1或2所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述组织块处理液中，聚乙二醇、鼠李糖脂和泊洛沙姆188的质量比为1:1:4。
4.根据权利要求1-3任一项所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述胶原蛋白酶液为I型胶原蛋白酶的D-Hank’平衡盐溶液；优选地，所述I型胶原蛋白酶的质量浓度为0.05-0.1％；优选地，所述胶原蛋白酶液与脐带基质的质量比为(1-2)：1。
5.根据权利要求1-4任一项所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述组织块处理液与组织块的质量比为(1-2)：1。
6.根据权利要求1-5任一项所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S2中，脐带基质剪成小块的大小为5-10mm3。
7.根据权利要求1-6任一项所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S4中，接种培养的具体步骤为：将待培养组织块接种于培养瓶中，每瓶接种4-6块，加入培养液，在37℃、5％CO2条件下进行培养，2-3d后首次更换新鲜培养液，以后每2-3d更换新鲜培养液。
8.根据权利要求1-7任一项所述的脐带间充质干细胞的分离培养方法，其特征在于，所述步骤S4中，消化采用0.125-0.25％的胰酶溶液。
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