[发明专利]一种脂肪干细胞的提取及培养方法

说明书

本发明公开了一种脂肪干细胞的提取及培养方法，包括以下步骤：S1、采集并清洗脂肪组织；S2、将清洗后的脂肪组织绞碎，加入消化液，在梯度振荡条件下进行消化，控制振荡转速从低到高，振荡一定时间后终止消化；S3、离心，去除上清液，将得到的沉淀重悬、筛网过滤后，再次离心，去除上清液，收集细胞；S4、将获得的细胞按一定接种密度进行接种，加入培养液培养，待细胞生长达到80‑90％融合时进行消化，按1:3‑1:4的比例传代，获得脂肪干细胞。本发明的脂肪干细胞的提取及培养方法能缩短脂肪干细胞的提取时间，有效提高脂肪干细胞的提取效率，同时保持传代稳定性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种脂肪干细胞的提取及培养方法。

背景技术

脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞，在一定的诱导环境下可以向骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、神经元细胞等分化。脂肪干细胞具有取材方便、分布广泛等优点，在组织工程学及再生医学领域可以作为细胞移植的种子细胞，有非常重要的研究和应用价值。

脂肪干细胞的传统提取方法主要是酶消化法，原理是利用胶原酶消化脂肪组织中的胶原组织，使细胞松散，便于脱落，再通过过滤、洗涤和离心等步骤去除漂浮在上层的脂肪细胞和油脂，从而得到脂肪干细胞。由于酶消化法的提取效率不高，目前通常联合利用组织绞碎和酶消化法来进行脂肪干细胞的分离提取。但是，这种方法依然存在消化时间长、提取过程中细胞损失多的问题，影响了细胞的存活率以及传代稳定性。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种脂肪干细胞的提取及培养方法，能提高脂肪干细胞的提取效率，同时保持传代稳定性。

本发明提出的一种脂肪干细胞的提取及培养方法，包括以下步骤：

S1、采集并清洗脂肪组织；

S2、将清洗后的脂肪组织绞碎，加入消化液，在梯度振荡条件下进行消化，控制振荡转速从低到高，振荡一定时间后终止消化；

S3、离心，去除上清液，将得到的沉淀重悬、筛网过滤后，再次离心，去除上清液，收集细胞；

S4、将获得的细胞按一定接种密度进行接种，加入培养液培养，待细胞生长达到80-90％融合时进行消化，按1:3-1:4的比例传代，获得脂肪干细胞。

优选地，所述步骤S2中，梯度振荡的转速为40-350rpm，振荡时间为18-24min。

优选地，所述步骤S2中，消化的具体步骤如下：先在40-60rpm转速下振荡1-2min，再将转速升至100-120rpm，振荡3-4min，再将转速升至180-200rpm，振荡6-8min，最后将转速升至330-350rpm，振荡8-10min，即可。

优选地，所述步骤S2中，消化液为I型胶原蛋白酶的D-Hank’平衡盐溶液；更优选地，所述I型胶原蛋白酶的质量浓度为0.1-0.2％。

优选地，所述消化液还包括魔芋葡甘聚糖、抗坏血酸和黄芪多糖；更优选地，所述魔芋葡甘聚糖为10-15mg/L，抗坏血酸为5-20mg/L，黄芪多糖为3-5μg/L。

优选地，所述步骤S2中，所述消化液与脂肪组织的体积比为(1-2)：1。

优选地，所述步骤S2中，所述脂肪组织绞碎为1-2mm³的小块。

优选地，所述步骤S4中，接种密度为1-2×10⁴/cm²。

优选地，所述步骤S4中，培养方法具体为：加入新鲜培养液，在37℃、CO₂浓度为5％的条件下进行培养，培养1-2天后弃去培养液，更换新鲜培养液，以后每24小时更换一次新鲜培养液。