[发明专利]一种用于肺癌早期筛查和诊断的联合检测血清标志物、试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种用于肺癌早期筛查和诊断的联合检测血清标志物、包含该联合检测血清标志物的试剂盒以及检测方法，属于生物医学技术领域。本发明基于癌症驱动基因在肿瘤发生和发展中所起的作用，定制138个癌症驱动基因编码的154个人源重组蛋白和本实验室提供的26种人源重组蛋白的蛋白质芯片，共包含180个人源重组蛋白质，通过蛋白质芯片初步筛选出肺癌的早期检测血清标志物，再经过ELISA实验进行验证，最终筛选出可用于肺癌早期筛查和诊断的一组肺癌联合检测血清标志物，其包括TP53、NPM1、GNA11、JAK2、TSC1和PIK3CA共6种基因编码的蛋白，可辅助肺癌的临床诊断，具有灵敏度高、特异性强、成本低等优点。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用于肺癌早期筛查和诊断的联合检测血清标志物、包含该联合检测血清标志物的试剂盒以及检测方法。。

背景技术

肺癌是中国以及全球发病率及死亡率第一的恶性肿瘤。在过去的40年间，肺癌的5年生存率仅从12％上升至16％，最主要原因是诊断时已属晚期，相反，早期诊断的肺癌进行手术后生存率可提高到80％。可见，早发现、早期诊断对肺癌的治疗及预后具有重要的临床意义。当前广泛运用的检测手段包括无创检查(如X线、CT、钼靶摄片等)和有创检查(纤维支气管镜、支气管造影、B超或CT定位下穿刺活检等)，但缺乏依从性和普及运用的可能。找寻新的肺癌分子标志物，尤其是血清分子标志物，让肺癌患者能够及时有效的早查、早诊、早治，是提高肺癌患者生存率、降低死亡率的关键科学问题。尽管目前有一些肿瘤标志物，如CA125(癌抗原125)、CA19-9(癌抗原19-9)、CEA(癌胚抗原)等可用于肺癌的辅助检测，但敏感性和特异性均不高，所以到目前为止尚没有理想的可供临床使用的肺癌早期筛查和诊断的标志物。

近年来，在人类肿瘤学的研究领域内，许多研究已经发现癌症患者血清中含有一组独特的诱发自身抗体反应的细胞蛋白，被称为肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)，其诱导产生的抗体称为抗TAA-抗体(autoantibody)。这一概念的提出对肺癌早期诊断研究指引了一个新的方向。肿瘤相关抗原(tumor-associate antigens，TAAs)的自身抗体在正常人和非肿瘤患者血清中不存在或滴度很低，而且患者血清中自身抗体水平的升高往往早于肿瘤症状的出现。再者，抗-TAA抗体具有其它肿瘤标志物不具备的优势，一方面是它能够在血清中持续稳定存在，而其它的标志物，包括TAA本身，在其被肿瘤细胞释放后就被快速降解或者在其进入血液循环后的很短时间内就被机体清除。而且，检测自身抗体的方法和试剂的普及性也有助于研究癌症患者体内抗-TAA抗体的产生规律和功能。因此，检测抗-TAAs的自身抗体可以作为早期肿瘤辅助筛查和诊断的血清标志物。目前各国学者已开展相关多项研究，值得一提的是EarlyCDT-Lung test的研究成果。EarlyCDT-Lungtest是首个通过检测血清中自身抗体以检测肺癌的工具，用以辅助内科医生的物理检查方法，从而提高肺癌诊断率。最初，该实验包括六种TAAs自身抗体(p53、NY-ESO-1、CAGE、GBU4-5、Annexin I和SOX2)的检测，检测肺癌的灵敏度和特异度分别为40％和82％。新一版的EarlyCDT-Lung test将TAAs自身抗体更新至7种(p53、NY-ESO-1、CAGE、GBU4-5、SOX2、HuD和MAGE A4)，其灵敏度和特异度也分别提高到47％和90％。有研究显示，这些自身抗体检测结果阳性的非小细胞肺癌患者中超过一半(57％)为I期和II期的早期肺癌，提示EarlyCDT-Lung test可作为辅助CT早期检测肺癌的生物学标志物检查工具。这些研究成果提示肿瘤相关抗原抗体的检测将有望成为肺癌早期检测的重要血清学生物标志物。但值得注意的是，EarlyCDT-Lung test虽然具有较高的特异度和阳性预测值，但灵敏度仍然不够理想(不到50％)，漏诊的病例较多，导致大量患者未能被及时发现，而错失手术治疗的良机。鉴于目前自身抗体检测在肺癌诊断的临床应用中仍有不足，不断地发现和鉴定新的肺癌相关TAAs仍是一项重要的工作。