[发明专利]一种分离的冬虫夏草菌及其在生产纤溶酶中的应用

说明书

本发明属于微生物领域，具体涉及一种分离的冬虫夏草菌及其在生产纤溶酶中的应用。本发明涉及到的冬虫夏草菌为冬虫夏草（Cordyceps sinensis）HZ‑01，保藏编号为：CCTCC NO:M2019712，该菌首次被发现可发酵生产纤溶酶，将固态发酵的粗酶液提纯后，获得纯化的纤溶酶CSP‑1，Native‑PAGE凝胶电泳可见单一条带，比活力为4186.25 UI/mg。经SDS‑PAGE凝胶电泳检验发现，CSP‑1由两个亚基组成，分子量分别为27.60KDa和23.83KDa，该酶不仅能降解纤维蛋白，而且还具有激活纤溶酶原的能力，显示出优良的新型血栓药物开发潜力。

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一种分离的冬虫夏草菌及其在生产纤溶酶中的应用。

背景技术

冬虫夏草是一种寄生在昆虫体内的子囊真菌，主要分布在海拔3000-5000米的高原草甸，与人参、鹿茸并称中国传统名贵药材，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种药用功效，广义范围的虫草属真菌有400余种之多。

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)在自然环境中主要通过侵染蝙蝠蛾幼虫，形成幼虫尸体与真菌子座的复合体，形体如蚕，长3～5cm，直径0.3～0.8cm，表面深黄色至黄棕色，有环纹20～30个，腹面有足8对，整体质脆易折断，断面平坦呈淡黄白色，气微腥，味微苦。冬虫夏草多产于高原地区，自然资源极为稀缺，但药用价值很高，目前出现的人工培养物多为其发酵菌丝体。

蛹虫草(Cordyceps militaris)与冬虫夏草属于不同种，形态特征与冬虫夏草完全不同(图12)。蛹虫草子座单生或数个一起从寄生蛹体的头部或节部长出，颜色为橘黄或橘红色，全长2～8cm，蛹体颜色为紫色，长约1.5～2cm。蛹虫草来源广泛，且易于培养产生子实体，作为一种食用菌，多用于食品加工中，其来源、生物学活性和功效成分与冬虫夏草存在显著差异。有研究者扩增5.8SrDNA、ITS2区间序列并进行序列比对，发现蛹虫草和冬虫夏草的同源性仅为75％。随着研究的深入，在新的分类体系中，冬虫夏草菌归属到Ophiocordycep s属，拉丁名变更为Ophiocordyceps sinensis。但现代学术论文中，冬虫夏草真菌部分仍多以Cordyceps sinensis指代。

张雯舒等从蛹虫草无性型深层培养液中分离得到纯化的纤溶酶，该酶是一种32kD的丝氨酸蛋白酶，最适作用温度及pH分别为41℃和7.40，纯化后的比活力为800.46U/mg(张雯舒,刘晓兰,郑喜群,等.蛹虫草无性型深层培养液中纤溶酶的分离纯化和酶学性质研究[J].微生物学通报,2012,39(12):1787-1795)，而Liu等以深层发酵法培养蛹虫草，分离得到由分子量分别为28kD和24.5kD的两个亚基组成的纤溶酶，最适温度及pH分别为37℃和7.20(Liu X,Kopparapu NK,Li Y,et al.Biochemical characterization of a n ovelfibrinolytic enzyme from Cordyceps militaris[J].International Journal ofBiological Ma cromolecules,2016,94(Pt B):793-801.)，而且一般情况，可见报道中的纤溶酶仅有纤溶酶活性，不能激活纤溶酶活性。

目前尚无由固态发酵的冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体获得高活性纤溶酶的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供了一株冬虫夏草(Cordyceps sinensis)HZ-01，该菌株的保藏编号为：CCTCC NO:M2019712。

本发明的另一个目的在于提供了冬虫夏草(Cordyceps sinensis)HZ-01在生产纤溶酶中的应用。

本发明的最后一个目的在于提供了冬虫夏草(Cordyceps sinensis)HZ-01生产纤溶酶的方法。