[发明专利]一种循环miR-1290的检测方法

权利要求书

1.一种循环miR-1290的检测方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)从检测样本血浆或血清中提取循环miRNA；

(2)茎环法逆转录：将步骤(1)中得到的miRNA进行特异性茎环法逆转录；

(3)qPCR检测：以步骤(2)中所获得的cDNA为模板，进行qPCR检测。

2.根据权利要求1所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，提取循环miRNA是通过核酸吸附柱来实现的。

3.根据权利要求1所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，逆转录体系包括逆转录缓冲液、逆转录酶、逆转录引物、无核酸酶纯水和miRNA模板；逆转录引物含有用于精确区分高度同源的miRNA的特异性茎环结构；针对所述miR-1290的逆转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；逆转录的反应条件为：16℃温浴30min，37℃温浴30min，85℃加热5min使酶失活，4℃保存。

4.根据权利要求3所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，逆转录体系总体积为20μL，其中，逆转录缓冲液10μL、逆转录酶1.5μL、逆转录引物1μL、无核酸酶纯水稀释的miRNA模板7.5μL。

5.根据权利要求1所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，qPCR检测的反应体系包括：Taqman预混液、特异性正向引物、通用反向引物、Taqman探针，无核酸酶纯水和cDNA模板；针对所述miR-1290的特异性正向引物、Taqman探针和通用反向引物的核苷酸序列分别如SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.10所示；qPCR检测的反应条件为：95℃预变性2.5min，95℃变性15s，60℃退火30s，72℃延伸1min，40个循环，最后72℃延伸10min。

6.根据权利要求5所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，qPCR检测的反应体系总体积为10μL，其中，Taqman预混液5μL、特异性正向引物(10mM)0.2μL、通用反向引物(10mM)0.2μL、Taqman探针(10mM)0.4μL，无核酸酶纯水稀释的cDNA模板4.2μL。

7.根据权利要求1所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，添加内参体系，内参体系包含：内参miR-16-5p和cel-miR-39以及相应的逆转录引物、qPCR正向引物和Taqman探针，

miR-16-5p的逆转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4，

miR-16-5p的qPCR正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，

miR-16-5p的Taqman探针的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，

cel-miR-39的逆转录引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，

cel-miR-39的qPCR正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，

cel-miR-39的Taqman探针的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；

miR-16-5p的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；

cel-miR-39的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示。

8.根据权利要求7所述的循环miR-1290的检测方法，其特征在于，所述内参cel-miR-39是在样本提取过程中加入的体积为2μL的内参cel-miR-39溶液，浓度为0.2uM。

9.一种试剂盒，其特征在于，其是用权利要求1-8任一所述的循环miR-1290的检测方法制备成miR-1290分析试剂盒。

10.一种应用，其特征在于，其是用权利要求1-8任一所述的循环miR-1290的检测方法，进行血清或血浆样本的miR-1290表达水平检测，以用于基础研究和临床应用。