[发明专利]一种基于偶氮偶联反应和表面增强共振拉曼散射检测水产品中酪胺含量的方法

说明书

本发明公开了一种基于偶氮偶联反应和表面增强共振拉曼散射检测水产品中酪胺含量的方法，特点是包括取新鲜鱼肉加入三氯乙酸溶液匀浆后，室温下振荡，再离心取上清液，残渣用三氯乙酸溶液重复提取，合并上清液定容过滤膜得待测样品溶液的步骤；将NaNO₂溶液加入到由对氨基苯甲酸溶解在HCl溶液中得到的混合液中，反应后在搅拌条件下，快速加入Na₂CO₃溶液和酪胺溶液，进行酪胺偶氮偶联反应，即得到酪胺衍生的偶氮化合物溶液的步骤；将酪胺衍生偶氮化合物溶液与Au@Ag NPs溶液按比例混合后进行光谱检测，根据酪胺浓度与特征峰信号强度之间的线性关系，计算出待测样品中酪胺的含量的步骤，优点是简单、快速以及灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种水产品中酪胺含量的检测方法，尤其是涉及一种基于偶氮偶联反应和表面增强共振拉曼散射检测水产品中酪胺含量的方法。

背景技术

酪胺（1-羟基-4-乙胺苯）属于生物胺的一种，是微生物活性降解产物。存在于发酵食品、饮料、肉类、鱼类、海鲜和乳制品。高浓度酪胺对人体健康危害极大，可促进周围血管收缩，刺激心律，提高血糖浓度，消除神经系统中的去甲肾上腺素，引起偏头痛。因此，建立一种快速、灵敏的酪胺测定方法十分重要。目前，国内外建立了多种方法来定量测定各类食品中酪胺的含量，包括结合不同的检测技术的高效液相色谱法、毛细管电泳、酶生物传感器方法，其中HPLC法是最常用的方法。虽然这些方法具有良好的选择性和检测限，但往往需要较长的时间、复杂的样品预处理和昂贵的仪器。因此，开发一种简便、灵敏度高的酪胺快速检测方法具有重要意义。

偶氮偶联反应是强酸和低温条件下由胺类(-NH₂)物质经HNO₂氧化成的重氮盐(-N≡N⁺)与酚类、苯胺和一些杂环化合物在碱性或中性溶液中发生亲电取代相互偶联生成偶氮分子的化学反应。所用的重氮组分为磺胺酸分子，重氮盐离子作为亲电试剂进攻偶联分子上最具有亲核性的位点(电子密度最强)，得到具有氮氮双键(-N=N-)结构的偶氮化合物。根据偶氮反应的机理，通常情况下重氮盐离子优先进攻酚羟基和芳香族氨基的对位，但是如果对位被占据，那么亲电取代就发生在羟基和氨基的邻位。

表面增强拉曼散射（SERS）是一种快速、具有极高灵敏度的光谱技术，在分析化学、生物医学和食品安全等领域具有广泛的应用。银，金和铜等金属纳米粒子是最常用的SERS基底。由于其独特的局部表面等离子体共振（LSPR）性质，核-壳纳米颗粒如镀银金胶体（Au@Ag NPs）在SERS构造中得到广泛应用。SERS对于吸附在或靠近金属纳米结构的分子来说是一种超灵敏的振动光谱技术，每种分子都有它独特的振动指纹信息，而且SERS的灵敏度还可以通过选择合适的激发波长匹配目标分子的电子跃迁态，也就是SERRS进一步提高。目前，国内外还没有公开任何关于基于偶氮偶联反应和表面增强共振拉曼散射检测水产品中酪胺含量的方法的相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种具有简单、快速以及灵敏度高的基于偶氮偶联反应和表面增强共振拉曼散射检测水产品中酪胺含量的方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于偶氮偶联反应和表面增强共振拉曼散射检测水产品中酪胺含量的方法，包括以下步骤：

（1）样品处理

取新鲜鱼肉加入三氯乙酸（TCA）溶液匀浆后，在室温下振荡提取，再离心取上清液，残渣用三氯乙酸溶液重复提取1次，合并上清液定容，过0.22μm滤膜，得待测样品溶液；

（2）酪胺偶氮偶联反应