[发明专利]一种药物筛选模型、药物筛选方法及其应用

说明书

本发明提供了一种药物筛选模型、药物筛选方法及其应用，所述药物筛选模型为dhx33基因缺陷型斑马鱼。本发明采用dhx33基因缺陷型斑马鱼作为药物筛选模型，dhx33基因不能正常表达，而p53基因及其下游p21和caspase8基因均表达升高，凋亡细胞的数量明显增加，头部和眼睛表型较野生型斑马鱼胚胎的头部和眼睛表型明显变小，表型的改变可以通过p53抑制剂的处理而恢复，dhx33基因缺陷型斑马鱼具有作为p53抑制剂的药物筛选模型的潜能。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种药物筛选模型、药物筛选方法及其应用，尤其涉及一种p53抑制剂筛选模型、筛选方法及其应用。

背景技术

p53是最重要的抑癌基因之一，临床上的多种抗肿瘤药物均以p53作为靶点，通过激活p53的活性抑制肿瘤形成。然而，近期研究表明，在肿瘤治疗的过程中，p53在杀伤肿瘤细胞的同时，也会损伤淋巴、造血、肠上皮细胞等增生活跃的细胞，产生副效应，因此在正常细胞中需要降低p53的活性。由于目前p53抑制剂的种类较少，需要通过药物筛选的方式寻找更多的p53抑制剂。

目前常用的药物筛选方法主要包括虚拟筛选、分子水平筛选和细胞水平筛选。其中，虚拟筛选是指在已知靶点和药物结构的情况下，通过计算机模拟二者之间的相互作用，从而筛选出可能有效的药物，具有成本低、速度快的优点，但是存在筛选得到的药物没有效果或效果甚微的问题，需要进一步通过生物实验进行验证；分子水平筛选是指将目的蛋白与候选药物混合，通过酶连免疫、荧光显色、核磁共振等方法检测蛋白与药物之间的相互作用，筛选得到的药物与目的蛋白结合力强，但是在细胞环境中却可能无法发挥作用；细胞水平筛选是指用候选药物处理靶细胞，再通过生化实验检验药物对靶细胞的作用，筛选得到的药物虽然能够有效地作用于靶细胞，但是实验流程复杂，且无法评估药物对整体生物是否有毒副作用。采用上述三种方法筛选得到的药物存在着不同的问题，限制了其在临床上的应用。

CN106699897A公开了一种用于筛选MdmX抑制剂或测试MdmX抑制剂的抑制活性的融合蛋白，包括测试序列、结合序列和连接臂序列；其中测试序列为MdmX序列或包含MdmX序列中的p53结合结构域的MdmX片段；结合序列为p53序列或包含p53序列中的MdmX结合结构域的p53片段；连接臂序列为一个肽段，其上下游分别与所述测试序列和所述结合序列之一连接，其氨基酸序列不参与融合蛋白的二级结构的形成，其长度和柔性足以使所述测试序列的空间结构的任一表面部分与所述结合序列的空间结构的任一表面部分在空间上有机会相接触；所述融合蛋白采用荧光光谱分析其抑制作用，但是在细胞环境中却可能无法发挥作用。

CN106701996A公开了一种筛选p53与MDM2蛋白相互作用的抑制剂的方法，包括以下步骤：1)构建p53与MDM2蛋白相互作用的表面等离子体激元共振传感芯片；2)利用该芯片筛选抑制剂；所述方法具有简单快速、免标记、特异性高、实时在线等优点，是一种分子水平筛选方法，筛选得到的药物同样存在在细胞环境中无法发挥作用的问题。

因此，建立一种新型的药物筛选模型，用于高通量快速筛选p53抑制剂，具有重要的临床意义和广泛的应用价值。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种药物筛选模型、药物筛选方法及其应用，利用敲除dhx33基因的生物体作为p53抑制剂的筛选模型，能够评估候选药物对完整生物个体的生长发育和存活的影响，提高了候选药物在临床治疗中的应用潜能，并使药物筛选过程简单快速。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种药物筛选模型，所述药物筛选模型为dhx33基因缺陷型斑马鱼。

本发明中，申请人利用基因敲除技术构建的dhx33基因缺陷型斑马鱼具有p53基因高表达的特性，表型较野生型斑马鱼发生明显变化，可以用于快速判断小分子药物是否能够通过抑制p53活性来恢复突变表型，从而筛选得到对整体生物有效果的p53抑制剂。