[发明专利]紫花三叉白芨的种子组培快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种紫花三叉白芨的种子组培快速繁殖方法，依次包括以下步骤：1)、取材：选用白芨植株上结的成熟蒴果内的种子；2)、种子的诱导萌发与分化：将种子接种到种子萌发分化培养基上进行培养，直至种子萌发并分化形成有两片小叶的幼苗；3)、生根壮苗：将幼苗转接于生根壮苗培养基上进行培养，直至培养获得同时满足以下条件的小苗：高度≥4.0cm、基部有直径≥0.4cm的假鳞茎、长出长度≥3cm的根至少2条；4)、移栽：将所得小苗进行移栽。采用本发明的方法可以快速简便地获得大量低成本的白芨组培种苗。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种紫花三叉白芨的组培快速繁殖方法。

背景技术

白芨(Bletilla striata Reichb)是多年生草本地生兰科白芨属植物，具有极高的药用价值、观赏价值和经济价值。白芨以干燥块茎入药，具有止血、抗菌和抗肿瘤的作用，近年来白芨已成为云南白药、快胃片、白芨颗粒、白芨糖浆等30多种中成药的主要原料，医药上还用于胃镜检查的保护剂，手术止血剂等。随着研究的不断深入，白芨的用途不再局限于医药领域，还成为化工用品的原料。白芨在美容方面具有奇特功效，有“美白仙子”的美誉，白芨面膜、白芨祛痘霜、白芨牙膏、白芨香皂相继开发。工业上将白芨用作染布的黏合剂、高级卷烟烟条黏合剂、高级陶瓷、橡胶制品中。白芨的种子非常细小且无胚乳，需与真菌共生才能萌发，白芨自然繁殖力低，加上长期采挖，使得野生白芨资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。

随着白芨利用价值价值不断被开发，市场对其需求量也逐渐上升，但由于传统的无性繁殖方式繁殖系数低，成本过高，无法满足大面积栽培种苗需要，目前组培苗已经成为当前白芨种植的主要种苗来源。

目前现有的白芨的培育方法，有以下几种方法：

1、《紫花白芨组织培养技术研究》：为建立白芨种子高效实用的组织培养技术体系，以紫花大种白芨成熟未开裂蒴果为外植体，进行组培快繁技术研究。结果表明：外植体表面清洁后，在5％次氯酸钠溶液中浸泡15min，之后将种子接种于萌发培养基，配方为MS+6-BA1.0mg/L。种子萌发并形成绿色原球茎即可转入幼苗营养生长培养基，配方为MS+6-BA2.0mg·/L+NAA0.5mg/L。幼苗生长到3cm以上时，接入生根培养基中，配方为1/2MS+6-BA0.1mg/L+NAA 0.5mg/L。待其根系长度达到1cm后，可进行炼苗移栽。

2、《白芨组培快速繁殖体系研究》：以白芨种子为材料，在不同液体培养基中进行无菌播种，通过调节光照时长和pH来筛选白芨种子萌发的最佳条件。利用组织培养方法对白芨进行愈伤组织诱导，并对愈伤组织进行抗褐化和再分化研究。白芨最佳液体快速繁殖条件为MS液体培养基，12h光照时长，pH值5.8～6.5；诱导培养基为MS+1.0mg·L^-1 6-BA+1.5mg·L^-1 2.4-D，增殖培养基为MS+1.0mg·L^-1 6-BA+1.5mg·L^-1 2.4-D+15mg·L^-1抗坏血酸，分化培养基为MS+0.1mg·L^-1NAA+0.5mg·L^-1 6-BA，生根培养基为MS+0.8mg·L^-1NAA+1.0mg·L^-1 6-BA，有机添加物对白芨有促进作用。

3、《白芨组培快繁试验研究》：以白芨种子作为试验材料，通过不同的培养基处理，试验研究了白芨的组培快繁技术。试验结果表明：①不同基本培养基对白芨种子萌发的影响，在诱导白芨种子萌发时，低盐的1/2MS作为种子萌发的基本培养基，更有力于种子萌发。而在白芨进行丛芽增殖的时候，富含更多盐分的MS则更加适合，能够提供更多的养分；②不同的植物激素对白芨组培的影响，不同的外源激素及不同的浓度对白芨组培各阶段的影响均不同，种子萌发最好用NAA1mg/L、丛芽增殖培养较适宜6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L、壮苗生根较适宜NAA0.5mg/L。