[发明专利]一种分子网络化分析地骨皮化合物结构的方法

说明书

本发明公开了一种分子网络化分析地骨皮化合物结构的方法，包括化学试剂和材料的选择，药材的选择，样品前处理和HPLC‑MS/MS网络化分析等步骤。本发明还包括借助于液质联用方法发现地骨皮中五个新化合物结构及其质谱裂解规律。本发明便于发掘地骨皮中的新结构类似物，解析新结构，发掘传统中药中微量成分，从分子水平理解中药药效机制，并加快中药现代化的发展。

技术领域

本发明属于化工领域，具体涉及一种分子网络化分析地骨皮化合物结构的方法。

背景技术

《中国药典》2015版，将来源于宁夏枸杞(Lycium barbarum L.)或L.ChinenseMill. (Solanaceae)的根皮均称为地骨皮。地骨皮是传统中药中重要的草药，味苦、寒，在中医临床 中被用于治虚劳潮热盗汗，肺热咳喘，吐血，衄血，血淋，消渴，痈肿，恶疮等疾病。前期 植物化学研究已经从地骨皮中发现了七十余种化合物包括生物碱，酚酰胺，环肽类，二肽， 环二萜和五环三萜等。地骨皮的提取物和单体化合物在抗氧化、抗肿瘤、抗细菌和真菌、抗 病毒、抗糖尿病和降血压等模型上具有多方面的活性。

为了更加深入从分子水平理解中药药效机制，并加快中药现代化的发展，对传统中药的 化学成分的研究再次成为热门的学科方向之一。早期的研究表明，环肽类化合物lyciumins A 和B具有抗血管紧张素转换酶的活性，被认为可能用于临床降血压。该类环肽类物质具有独 特的化学骨架，结构中含有一个由色氨酸吲哚N¹和甘氨酸C_α关环结构，一直吸引着化学家 和药理学家的关注。

天然产物由于它们复杂的化学结构和多样性生物活性一致是临床药物开发的重要资源。 从自然界发现新的化学结构不仅能丰富天然产物结构库，同时也将为化学合成设计新结构药 物提供基本骨架。在过去的几十年里，随着质谱的快速发展，特别是串联质谱的快速发展和 应用，大量新化学结构被发现。在我们早期的研究工作中，我们利用分子网络化方法对菌株 Streptomyces sp.SS的发酵上清液的LC-MS/MS进行重分析，发现了20个新结构三三霉素类 似物。

发明内容

本发明的目的是提出一种利用HPLC-Q-TOF MS方法对地骨皮50％乙醇水提取物进行 分析，发掘新结构类似物，解析新结构，发掘传统中药中微量成分，从分子水平理解中药药 效机制，并加快中药现代化的发展。

为了达到上述目的，本发明提出一种分子网络化分析地骨皮化合物结构的方法，包括以 下步骤：

(1)化学试剂和材料

色谱甲醇购自上海泰坦试剂有限公司；屈臣氏纯净水被用于HPLC；乙酸和氨水均为分 析纯，购自北京化学试剂厂；

固相萃取柱，型号为Sep-Pack C18；色谱柱型号CAPCELL PAK C18 AQ；液质联用仪器 为Agilent 1100-Agilent 6510Q-TOF质谱；

(2)药材

实验用地骨皮，购于北京同仁堂；

(3)样品前处理

干燥地骨皮100g使用100ml 50％乙醇在室温下超声提取3遍，每次2小时；乙醇提取 液减压条件下蒸馏回收，得到2.0ml水溶液；残留液上样至Sep-Pack C18固相萃取柱，后依次使用纯水、50％甲醇和HPLC级别甲醇得到样品1-3，所有样品在12000转下离心10分钟，上清液用于HPLC-Q-TOF测试；

(4)HPLC-MS/MS分析

两项梯度洗脱用于HPLC-Q-TOF系统，A相为色谱级甲醇，B相为0.1％醋酸氨水溶液； 70分钟内从A相10％梯度增加到90％，流速为0.8ml/min，流出液通过一个三通装置等量分 配至DAD和Q-TOF检测系统；DAD设置为254nm，柱温设定为25℃，每次进样20微升；