[发明专利]一种前列腺特异性抗原检测的比率电化学传感器的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种前列腺特异性抗原检测的比率电化学传感器的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括如下步骤：

（1）Apt-Ag@RF-Ag NPs溶液的制备：

向Tris-硼酸TBE缓冲溶液中加入Ag@RF-Ag NPs溶液以及浓度为0.5~1.5 μM的前列腺上皮细胞分泌的特异性抗原适配体溶液，室温下摇晃11~13h，之后离心去除上清液，将固相物质重新分散在超纯水中，即得Apt-Ag@RF-Ag NPs溶液；

（2）MGCE/rGO/Fe₃O₄/Cu₂O-Apt-Ag@RF-Ag电极的制备：

利用粒径为0.03~0.07 μm的三氧化二铝抛光粉对直径为3~5 mm的MGCE电极进行打磨，之后再依次用乙醇和超纯水超声洗涤，并吹干待用，将rGO/Fe₃O₄/Cu₂O NSs溶液滴涂在电极表面，在室温下放置0.5~1.5 h，得到MGCE/rGO/Fe₃O₄/Cu₂O电极；随后将步骤（1）中所得Apt-Ag@RF-Ag NPs溶液滴涂在MGCE/rGO/Fe₃O₄/Cu₂O电极上，在30~40 ℃下孵育30~50 min，之后用水冲洗电极，即得MGCE/rGO/Fe₃O₄/Cu₂O-Apt-Ag@RF-Ag电极；

（3）比率电化学传感器的构建：

取5~15 μL一系列不同浓度的PSA标准溶液加到电极表面，在35~40 ℃温度条件下孵育20~40 min，冲洗电极，通过微分脉冲伏安法DPV检测MGCE/rGO/Fe₃O₄/Cu₂O-Apt-Ag@RF-Ag电极的电化学信号，并分别记录测试数据中Ag NPs与Cu₂O NPs的电化学响应情况，横坐标是PSA浓度的对数值，纵坐标是Ag NPs的氧化峰峰强度与Cu₂O NPs的氧化峰峰强度的比值，建立Ag NPs的氧化峰峰强度与Cu₂O NPs的氧化峰峰强度的比值和PSA浓度对数值间的标准曲线；

所述RF是指间苯二酚-甲醛。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中所述Ag@RF-Ag NPs溶液的制备步骤如下：

①将间苯二酚水溶液、甲醛溶液以及AgNO₃溶液置于三口烧瓶中混合均匀，在磁力搅拌条件下加热至沸腾，随后加入氢氧化铵溶液，继续加热回流20~40 min，自然冷却至室温，离心洗涤，在真空下干燥得到Ag@RF NPs；

②将步骤①中所得Ag@RF NPs置于氨气环境中，并称取80~120 mg干燥的Ag@RF NPs置于干净的滤纸上，将滤纸放在盛有5~15 mL浓度为20%~30%的氨水中，静置一定时间后将反应刻蚀后的纳米粒子溶于5~15 mL水中，即得浓度为8~16 mg/mL的Ag@RF-Ag NPs溶液。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（2）中所述rGO/Fe₃O₄/Cu₂O NSs溶液的制备方法是：取rGO/Fe₃O₄ NSs溶液加入到硝酸铜溶液中，室温超声20~30 min，使溶液充分混合均匀，随后将NaOH溶液加入到混合体系中搅拌20~40 min，待混合均匀后加入水合肼溶液，并在室温下搅拌30~50 min，用水洗涤后离心取固相，将所得固相重新分散在超纯水中，得到rGO/Fe₃O₄/Cu₂O NSs溶液。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）中所述PSA适配体序列为5'-SH-(CH₂)₆-ATT AAA GCT CGCCAT CAA ATA GC-3'。