[发明专利]一种金水宝片氨基酸的含量测定方法

权利要求书

1.一种金水宝制剂中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：

1)供试品溶液的制备：称取金水宝制剂，将其制成粉末，加浓盐酸，充入氮气无氧加热水解，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容，取定容后的氨基酸水解液，用样品稀释液定容，即得供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：精密称取各氨基酸对照品适量置同一容量瓶中，加入样品稀释液定容即得混合对照品溶液；

3)测定，将供试品溶液和对照品溶液分别注入氨基酸自动分析仪，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量。

2.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，其中氨基酸自动分析仪的色谱条件如下：LCAK06/Na离子柱；流动相：流动相A(称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚0.5g，加适量水溶解，加甲醇65mL和浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH调pH至3.45)、流动相B(称取二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g，加适量水溶解并定容至1000mL，HCl调pH值至10.85)；按照以下条件进行梯度洗脱：

其中，所述稀释液的制备方法如下：称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚2.0g加适量水溶解后加入浓盐酸10.4mL，定容至1000mL，用氢氧化钠溶液调节pH值为2.2，即得。

3.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，其中，在步骤中需要用到茚三酮溶液，所述茚三酮溶液的制备方法：称取三水乙酸钠272.0g、醋酸钾196.0g，量取乙酸200mL，加适量水溶解后定容至1000mL即得钠钾缓冲液，称取茚三酮20.0g、苯酚2.0g，加入甲醇600mL，缓慢搅拌溶解后加钠钾缓冲液400mL混合，氮吹10min，再加入0.2g抗坏血酸后氮吹10min即得。

4.如权利要求1所述的含，量测定方法，其特征在于，其中，各氨基酸对照品为：门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸、脯氨酸的对照品，这些对照品可以从市场上购买得到，也可以按照现有技术制备得到，其纯度较高，一般大于98％重量百分比。

5.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：精密称取金水宝片粉末100mg置25mL水解管中，加入6mol/L盐酸溶液10mL后充氮气密封，置于烘箱中水解14～22h，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容至50mL，取定容后的氨基酸水解液2mL，用样品稀释液定容至10mL，即得供试品溶液，

2)对照品溶液的制备：精密称取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量置同一容量瓶中，加稀释液溶液定容即得混合对照品溶液，

3)分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液50μl，注入氨基酸自动分析仪，测定，得到色谱图，根据色谱图计算每一种氨基酸的含量以及全部氨基酸的含量，

色谱条件：LCAK06/Na离子柱；流动相：流动相A(称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚0.5g，加适量水溶解，加甲醇65mL和浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH调pH至3.45)、流动相B(称取二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g，加适量水溶解并定容至1000mL，HCl调pH值至10.85)；梯度洗脱

根据本发明的测定方法，优选测定对象的金水宝制剂为金水宝片，每片总氨基酸含量不少于50mg为合格品。

6.如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，步骤如下：

1)供试品溶液的制备：精密称取经匀质处理的金水宝片约0.1g置25mL水解管中，加入6mol/L盐酸溶液10mL后充氮气密封，置110℃烘箱中水解18h，取出后放至常温，将水解液用滤纸滤过并用水定容至50mL，取定容后的氨基酸水解液2mL，用样品稀释液定容至10mL，即得供试品溶液，

2)对照品溶液的制备：另取天门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸对照品适量，加样品稀释液配制成浓度各为0.06、0.06、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.04、0.03、0.03、0.04、0.03、0.04、0.01、0.01、0.01mg/ml的混合溶液，作为对照品溶液，

3)测定：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液50μl，注入氨基酸自动分析仪，测定，即得，

色谱条件：LCAK06/Na离子柱；流动相：流动相A(称取二水合柠檬酸三钠11.8g、柠檬酸6.0g、苯酚0.5g，加适量水溶解，加甲醇65mL和浓盐酸5.6mL，用水定容至1000mL，NaOH调pH至3.45)、流动相B(称取二水合柠檬酸三钠19.6g、氢氧化钠3.1g、硼酸5.0g，加适量水溶解并定容至1000mL，HCl调pH值至10.85)；梯度洗脱

根据本发明的测定方法，优选测定对象的金水宝制剂为金水宝片，每片总氨基酸含量不少于50mg为合格品。