[发明专利]产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明属于微生物筛选及发酵工程领域，涉及一株产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌及其应用；本发明首先提供一株产高温蛋白酶菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)YYC4，保藏编号为CCTCC NO:M 2019599；然后将地衣芽孢杆菌YYC4应用于油料饼粕发酵制备生物活性肽饲料，步骤为：将油料饼粕加入水中，搅拌混合，得到混合液；然后接种地衣芽孢杆菌发酵种子液，在一定湿度和温度条件下进行发酵，发酵后得到活性肽生物饲料；本发明提供的产高温蛋白酶菌株能够在60℃条件下较好地生长，在油料饼粕蛋白在不灭菌条件下，直接高温固态发酵制备生物活性肽饲料，效果显著，成本极低，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于微生物筛选及发酵工程领域，具体涉及一株产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌及利用该菌株高温发酵饼粕制备多肽生物饲料的用途。

背景技术

高温菌是一类最适生长温度大于50℃的重要微生物，能产生特殊功能的酶类及其它活性物质，在生存机制和应用方面越来越受到关注。将高温菌应用于发酵工业可有效解决中温微生物最适生长温度(25～37℃)与发酵过程高温环境(50～65℃)不匹配的问题。另外，高温菌种世代时间短，合成次级代谢物速度快，可明显缩短发酵周期；发酵过程中产生的高温，可减少杂菌污染并能够杀死致病菌和病毒，省去高温高压灭菌步骤，简化发酵工艺，降低生产成本。由此看出，利用高温菌进行发酵具有广阔的发展前景。

近年来，研究者陆续从火山口、堆肥、温泉等极端环境中筛选出了高温菌。据报道，常温环境(如土壤、湖水及废水等)中也存在一定数量的高温菌。续钊从高温堆肥土样中分离到两株可以在70℃生长的菌株，经鉴定与嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)具有99％的相似性，将两菌株以外源嗜热菌的形式单一或组合添加到以城市污泥为原料的好氧堆肥中，堆肥温度比对照提前4d到达高温期,并且维持时间长；含水量、有机质及植物毒性大幅降低，嗜热菌数量和过氧化氢酶活增加。田康明等人利用产乳酸嗜热菌Bacilluscoagulans进行发酵，55℃发酵54h，总乳酸产量最高可达74.80g/L。李世林等人从烟叶中筛选出耐高温蛋白酶产生菌，用该枯草芽孢杆菌GW-3发酵烟叶，蛋白质降解率为16.74％。Wang等人在家禽排泄物堆肥过程中筛选出的嗜热放线菌Thermoactinomyces sp.strainYT06在60℃下能高效降解鸡羽毛。

目前，利用油料饼粕发酵制备多肽生物饲料多采用中温微生物，需要对底物进行灭菌处理，并需严格控制发酵温度及条件，生产成本较高。目前，对于利用高温产蛋白酶菌株，在底物不灭菌条件直接固态发酵油料饼粕生产生物饲料的研究还较少。本发明对于简化饼粕发酵生物饲料的生产工艺，降低生产成本等具有一定的意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明旨在解决所述问题之一，本发明提供一株产高温蛋白酶菌株地衣芽孢杆菌YYC4，本发明所提供的产高温蛋白酶菌株能够在60℃条件下较好地生长，在油料饼粕蛋白不灭菌条件下，直接高温固态发酵制备生物活性肽饲料方面具有潜在的应用价值。该方法操作简便，效果显著，成本极低，经济效益显著，获得的生物饲料品质佳，活性肽含量明显提高。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案具体如下：

本发明首先提供一株产高温蛋白酶菌株，保藏编号为CCTCC NO:M 2019599，建议的分类命名为Bacillus licheniformis YYC4地衣芽孢杆菌YYC4；

本菌株是从红云红河烟草(集团)有限责任公司生产的盒装云烟(市售)中分离得到的，于2019年08月02日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国.武汉.武汉大学；

此外，本发明还提供一种产高温蛋白酶地衣芽孢杆菌YYC4的应用，将地衣芽孢杆菌YYC4应用于油料饼粕发酵制备生物活性肽饲料，按照下述步骤进行：

(1)地衣芽孢杆菌YYC4的活化培养：将分离得到的地衣芽孢杆菌YYC4接种到液体培养基进行活化培养，得到地衣芽孢杆菌发酵种子液；