[发明专利]一种从发酵液中提取纯化多杀霉素的方法

说明书

本发明公开了一种从发酵液中提取纯化多杀霉素的方法，包括，往多杀霉素发酵液中加入碱调pH大于8，沉淀后固液分离，得滤渣；将滤渣溶于水中，加入酸调pH小于5，过滤后浓缩，得浓缩液；往浓缩液中加入有机溶剂进行萃取处理，收集有机层后加入活性炭脱色，得萃取脱色液；往萃取脱色液中加入酸液进行反萃取处理，收集水层后加入活性炭脱色，得反萃脱色液；往反萃脱色液中加碱结晶，分离得到多杀霉素粗品。本发明的方法综合采用板框过滤、陶瓷膜过滤、萃取、洗涤、脱色、反萃取、脱色和结晶技术，工艺周期短，不加热，溶剂使用少，去除杂质效率高，工艺操作简便，成本低廉，适合工业化生产多杀菌素。

技术领域

本发明属于生物药物的提纯技术领域，具体涉及一种从发酵液中提取纯化多杀霉素的方法。

背景技术

多杀霉素，又名多杀菌素(Spinosad)，是在多刺甘蔗多孢菌(Saccharopolysporaspinosa)发酵液中提取的一种大环内酯类无公害高效生物杀虫剂。产生多杀菌素的亲本菌株土壤放线菌多刺甘蔗多孢菌(Saccharopolyspora spinosaMetrzYao)最初分离自加勒比的一个废弃的酿酒场；美国陶氏益农公司(现为陶氏农业科学公司)的研究者发现，该菌可以产生杀虫活性非常高的化合物，实用化的产品是spinosyn A和spinosyn D的混合物，故称其为Spinosad。

多杀霉素的作用方式新颖，可以持续激活靶标昆虫乙酰胆碱烟碱型受体，但是其结合位点不同于烟碱和吡虫啉；多杀霉素也可以影响GABA受体，但作用机制不清。目前，还不知道多杀霉素是否与其他类型的杀虫剂有交叉抗性。这些化合物可以引起靶标植食性昆虫如毛虫、潜叶虫、蓟马、和食叶性甲虫迅速死亡，尽管管理部门强烈要求在抗性未出现时使用，该化合物的中度残留活性降低了抗性和群发生的可能性。当以12-150g/hm应用时，未发现有药害。

现有技术中，多杀霉素的提取方法，多采用加助滤剂、高温加热或离心预处理发酵液(如公开号为CN107474088A、CN109628530A和CN101906124B的中国专利)，或者加诸如丙酮等有机溶剂萃取，或者含溶剂情况下大孔树脂吸附等常规手法分离纯化多杀菌素(如公开号为CN107474088A、CN109628530A、CN109929004N和CN104059117A的中国专利)，在上述方法中，用到加热会对多杀菌素造成破坏，用溶剂萃取和树脂分离的方法，则由于溶剂使用量过大存在安全风险，且周期长，成本高。

鉴于此，有必要提供一种高效简便且成本低廉的提取纯化多杀霉素的方法。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种从发酵液中提取纯化多杀霉素的方法。

本发明采用如下技术方案：

一种从发酵液中提取纯化多杀霉素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)往多杀霉素发酵液中加入碱调pH大于8，沉淀后固液分离，得滤渣；

(2)将滤渣溶于水中，加入酸调pH小于5，过滤后浓缩，得浓缩液；

(3)往浓缩液中加入有机溶剂进行萃取处理，收集有机层后加入活性炭脱色，得萃取脱色液；

(4)往萃取脱色液中加入酸液进行反萃取处理，收集水层后加入活性炭脱色，得反萃脱色液；

(5)往反萃脱色液中加碱结晶，分离得到多杀霉素粗品。

本发明巧妙利用多杀菌素的特点，在不同步骤中去除不同杂质，整个工艺周期短，不加热，溶剂使用量少，去除杂质效率高，可制得色谱纯度在90％以上的多杀霉素。

以下对各步骤做进一步解释说明。

步骤(1)中，所述碱的加入量为调节pH为8.0-13.0，所述碱选自氢氧化钠、氨水、碳酸氢钠和碳酸氢铵中的一种或多种。