[发明专利]一种X-Pro结构特异型ACE抑制肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种X‑Pro结构特异型ACE抑制肽及其制备方法，所述制备方法包括采用胰凝乳蛋白酶和脯氨酸特异内切酶复合酶酶解牡蛎蛋白，采用Sephadex G25凝胶过滤层析、Superdex^TM 30 Increase 10/300 GL凝胶过滤层析、反相高效液相色谱对牡蛎蛋白水解产物进行分离纯化，得到纯度较高的组分，经鉴定ACE抑制肽的氨基酸序列为Ser‑Ala‑Pro、Ala‑Met‑Pro、Thr‑Ser‑Gly‑Pro和Ser‑Asp‑Pro，这四种肽未曾报道过，为制备治疗高血压的药物提供了新途径。

技术领域

本发明涉及生物肽的制备技术领域，特别是涉及一种X-Pro结构特异型ACE抑制肽及其制备方法。

背景技术

高血压是最常见的心血管疾病之一，它能造成大脑、心血管、肾脏的损害，是引起脑卒中、心力衰竭和冠心病等的重要因素，严重威胁着人类的健康。因此，治疗和预防高血压对提高人类的健康水准，延长寿命有着重要的意义。血管紧张素转换酶(ACE)在人体内通过肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统调节人体血压，ACE可以将血管紧张素I转换为血管紧张素II，使周围小动脉、血管平滑肌收缩，同时刺激醛固酮分泌，促进人体肾脏对Na⁺、K⁺的重吸收，引起钠储量和血容量的增加，使血压升高；还可以使舒缓激肽失活，引起血压升高。综上所述，ACE一方面产生使血压上升的血管紧缩素II，另一方面，使具有血管舒张作用的舒缓激肽失活，这都造成了血压的上升。所以，如果抑制了ACE的活性，就可以起到降压的作用。

目前，化学合成了很多的ACE抑制剂，比如卡托普利、赖诺普利，虽然已经广泛应用于临床，降压效果显著，但是存在很多的副作用。食源性ACE抑制肽不仅没有毒副作用，本身还具有其他一些生理活性。目前主要是通过中性、碱性、胃蛋白酶、胰蛋白酶这一些比较常见的特异性较低的蛋白酶酶解蛋白资源，存在很大的随机性和盲目性，不利于研究ACE抑制肽的构效关系，定向特异性酶解蛋白质的研究鲜有涉及。

发明内容

本发明的目的是研究ACE抑制肽的结构特点和构效关系，提供特异性蛋白酶定向酶解牡蛎蛋白质，获得具有特定羧基末端的高活性的ACE抑制肽，以解决上述现有技术存在的问题。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了一种X-Pro结构特异型ACE抑制肽，所述X-Pro结构特异型ACE抑制肽的氨基酸序列为Ser-Ala-Pro、Ala-Met-Pro、Thr-Ser-Gly-Pro和Ser-Asp-Pro。

本发明还提供所述X-Pro结构特异型ACE抑制肽的制备方法，包括以下步骤：

步骤(1)：将全牡蛎肉进行预处理，制备牡蛎蛋白；

步骤(2)：第一步酶解：用胰凝乳蛋白酶酶解牡蛎蛋白，得到酶解物Ⅰ；

步骤(3)：第二步酶解：用脯氨酸特异内切酶酶解酶解物Ⅰ，得到富含Pro、Tyr、Phe和Trp羧基末端的牡蛎ACE抑制肽混合物；

步骤(4)：通过Sephadex G25凝胶过滤层析、Superdex^TM 30Increase10/300GL凝胶过滤层析、反相高效液相色谱对步骤(3)得到的混合物进行分离纯化，得到所述X-Pro结构特异型ACE抑制肽。

进一步的，步骤(1)中将全牡蛎肉进行预处理的过程包括：将全牡蛎肉匀浆，加适量水，使固形物浓度为3wt％。

进一步的，步骤(2)中胰凝乳蛋白酶的加入量为固形物的0.2wt％-2.wt0％。

进一步的，步骤(2)中酶解条件为在37℃，pH 8.0条件下酶解1-6h。

进一步的，步骤(3)中脯氨酸特异内切酶的加入量为50-1000U/g。