[发明专利]一种生物酶催化制备(S)-3-苯基-1,2-环氧丙烷及其衍生物的方法

权利要求书

1.一种生物酶催化制备(S)-3-苯基-1,2-环氧丙烷或(S)-3-苯基-1,2-环氧丙烷衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)合成HhAPL基因，并将所述HhAPL基因插入到pET24(a)载体的多克隆位点，获得表达载体pET-Apl；

2)将所述表达载体pET-Apl转入大肠杆菌获得表达HhAPL基因的重组细胞，离心收集所述重组细胞；

3)用缓冲液将所述重组细胞配制成50～200g/L的菌悬液；

4)将所述菌悬液、底物辅助溶剂和底物混合获得反应体系，反应，获得目标产物；所述菌悬液和底物辅助溶剂的体积比为(18～22):1；所述底物在反应体中的浓度为1～20g/L；

所述底物为烯丙基苯或烯丙基苯衍生物；

所述目标产物为(S)-3-苯基-1,2-环氧丙烷或(S)-3-苯基-1,2-环氧丙烷衍生物；

步骤1)中所述HhAPL基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述烯丙基苯衍生物为3-(4-甲氧基苯基)-1-丙烯，2-烯丙基苯酚，(±)-1-苯基-2-丙烯醇，(±)-1-(3-氟苯基)-2-丙烯醇，(±)-1-(4-氟苯基)-2-丙烯醇，(±)-1-(2-萘基)-2-丙烯醇，(±)-1-(1-萘基)-2-丙烯醇，(±)-1-(3-甲基苯基)-2-丙烯醇，(±)-1-(4-甲基苯基)-2-丙烯醇或(±)-1-苯基-3-丁烯-2-醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述离心的转速为5000～7000rpm，所述离心的时间为4～6min；所述离心的温度为3～5℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、Tris-HCl缓冲液或磷酸钾缓冲液；所述磷酸钾缓冲液的浓度为0.08～0.12mol/L，所述磷酸钾缓冲液的pH值为5.5～8.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述反应的温度为25～40℃，所述反应的时间为22～26h，所述反应的过程中伴随震荡，所述震荡的转速为200～240rpm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中底物辅助溶剂为正辛烷或邻苯二甲酸二异辛烷酯。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)所述反应结束后，还包括目标产物的提取步骤：

将反应结束后的体系与乙醚混合，萃取，收集有机相，无水硫酸钠干燥、过滤、蒸出溶剂、硅胶柱层析获得目标产物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，反应结束后的体系与乙醚的体积比为1:(0.8～1.2)；所述萃取的次数为1～3次。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述硅胶柱层析的流动相为石油醚和乙酸乙酯；所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为100:1；所述硅胶柱层析的硅胶的粒径为200～300目。