[发明专利]一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法

说明书

本发明涉及一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，以含有愈创木酚的低熔点琼脂糖作为显色基质，将预培养获得的香菇菌丝接种于显色基质，酶促反应后，用分光光度法读取显色基质的OD值，所述显色基质中低熔点琼脂糖和愈创木酚的浓度分别为1％和0.02％，所述低熔点琼脂糖的熔点为65℃。本发明的一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，通过将显色定性方法和分光光度法结合，不仅能够快速检测大批量菌株的酶活的连续性变化，还能够根据所获得的酶活结果对出菇情况进行预测，从菌丝预培养到检测酶活最长不超过13d，预测准确率高达85％以上。

技术领域

本发明属于真菌酶技术领域，具体涉及一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法。

背景技术

目前测定真菌酶活的方法多种多样，没有一个统一的标准，这些方法可整理分为两类，定性分析方法和定量分析方法，都是依据胞外酶和底物产生的化合物进行分析的。例如，漆酶的底物一般是愈创木酚、ABTS、邻联甲苯等；纤维素酶的3种水解酶一般是以滤纸为底物；多酚氧化酶反应体系中除了酶液，缓冲液，还需要加邻苯二酚作为底物。酶定性分析方法一般是平板显色圈法，依据变色圈的出现早晚，颜色深浅对酶活进行简单判断。这类方法操作简单、快速，适用于大量样品的初筛，但无法证实产酶的确切情况；定量分析方法有O₂，微量热法，脉冲激光光声分析法，高效液相色谱法和极谱法，这几种方法可直接或间接测得具体酶活，精确度高，但操作相对复杂，成本也较高，因此如今用的也不是很多。分光光度法相对这几种方法来说，成本低，操作较简单，能够依据吸光值(OD)随时间变化的关系计算出酶活，是目前国内外最常用的方法。但是该法在应用当中尚且存在一些局限问题。其一，当大量样品需要检测时，液体发酵培养既费时又费力；其二，不适用于检测某个时间段内的连续的酶活，无法了解到胞外酶的早期的产酶情况的变化。

此外，对香菇漆酶的研究多有报道，有漆酶高产菌株选育，有诱导漆酶产量增加的，还有对香菇生长过程中各个生长时期的漆酶家族的转录表达研究，以及对漆酶家族中同工酶功能的探讨研究。但是将菌株早期的菌丝阶段的酶活变化规律和出菇能力联系在一起的实验研究却未见报道。

因此，研究一种将菌株早期的菌丝阶段的酶活变化规律和出菇能力联系在一起的香菇菌株出菇能力快速预测的方法极具现实意义。

发明内容

本发明的目的是克服上述现有技术中缺少将菌株早期的菌丝阶段的酶活变化规律和出菇能力联系在一起的实验研究的缺陷，提供一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，通过将显色定性方法和分光光度法结合，快速检测大批量菌株的酶活的连续性变化，根据所获得的酶活结果对香菇菌株的出菇情况进行预测。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，以含有愈创木酚的低熔点琼脂糖作为显色基质，该显色基质具有良好的透明度和反应适应性，将预培养获得的香菇菌丝接种于显色基质，酶促反应后，用分光光度法读取显色基质的OD值。

其优选的技术方案为：

如上所述的一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，所述显色基质中低熔点琼脂糖和愈创木酚的浓度分别为1％和0.02％。

如上所述的一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，所述低熔点琼脂糖的熔点为65℃。

如上所述的一种香菇菌株出菇能力快速预测的方法，具体步骤如下：

(1)将香菇菌丝接种在PDA平板上活化培养，为获得菌丝生长状态一致且数量较多的接种块，在活化好的菌株菌丝边缘处打孔，此时菌龄约10天，视为活化完成，打孔孔径为PDA平板孔径，另取培养基厚度为3～4mm的PDA平板在并在该平板中心接种，重复接多块平板，将接种后的PDA平板在恒温培养箱中培养，接种块周围可见明显新生菌丝且菌落边缘清楚后，采用十字交叉等方法每24小时画线，测量菌株直径，记录菌株生长速度，重复上述操作，直至菌株直径达到培养皿边缘，停止画线，PDA平板上活化培养的时间不超过13天；