[发明专利]一种PiT-1单克隆抗体、制备方法及应用

说明书

本公开属于畜禽肠道磷吸收调控技术领域，具体涉及一种PiT‑1单克隆抗体、制备方法及应用。畜禽对饲料中磷的利用效率较低，既浪费不可再生的无机磷矿资源，又造成环境污染。针对上述现状，本公开通过筛选获得了PiT‑1位于细胞膜外的抗原表位肽序列，针对性的设计了相应的PiT‑1单克隆卵黄抗体，可中和抑制肠上皮细胞顶膜上PiT‑1的磷感受功能，维持肠道NaPi‑IIb蛋白表达，促进肠道对磷的吸收及转运。畜禽通过采食掺入该抗体的饲料，血清中磷含量显著提升，排泄物中的磷含量显著降低，节约资源、保护环境。

技术领域

本公开属于畜禽肠道磷吸收调控技术领域，具体涉及一种PiT-1抗体在制备畜禽饲料、营养剂方面的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本公开的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

磷是畜禽生存、生长、生产所必需的矿物元素，是制定畜禽饲料配方时必须充足供应且添加量较大的营养素。但是，畜禽对饲料中磷的利用效率较低，我国畜牧生产所投入的磷有50％左右随排泄物进入土壤和水体，造成资源浪费和环境污染。研发提高畜禽肠道磷吸收效率的技术，既能减少饲料中不可再生无机磷矿资源的投入，又可降低畜禽养殖过程中磷的排泄量。

肠绒毛对磷的吸收主要依赖于钠磷协同转运蛋白(sodium phosphatecotransporter,NaPi)介导的次级主动运输过程，高效的NaPi转运系统是保障畜禽肠道磷吸收效率的关键。肠上皮细胞顶膜分布有NaPi-IIb和NaPi-III(包括PiT-1和PiT-2)。由NaPi-IIb转运的磷可占肠道磷主动吸收总量的90％以上。PiT-1和PiT-2分布于肠道，其磷转运功能较弱，但可作为“磷感受器”发挥作用。研究显示，肠腔内磷浓度升高时，肠上皮细胞顶膜上的PiT-1可感知该信号，激活细胞外信号调节激酶1和2(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)，下调NaPi-IIb蛋白表达，降低磷吸收效率，以适应磷环境变化。因此，PiT-1介导的肠腔磷浓度感受机制是限制畜禽肠道磷吸收效率的因素之一。

基于以上结果可知，PiT-1和NaPi-IIb是调控畜禽肠道磷吸收的重要靶位。目前，尚无技术通过直接干预肠道PiT-1的磷感受功能，改变肠道NaPi-IIb的表达，继而调控畜禽肠道磷吸收效率。

发明内容

针对上述研究现状，本公开设计合成一种PiT-1合成肽疫苗，通过对产蛋家禽免疫，获取PiT-1单克隆卵黄抗体，使畜禽通过采食该抗体，中和了肠道中的PiT-1，继而维持肠道中NaPi-IIb蛋白表达量，保证肠道磷吸收效率。本公开经筛选获取了畜禽PiT-1蛋白氨基酸序列中可作为抗原表位的一段氨基酸序列，诱导产蛋家禽产生相应的PiT-1单克隆抗体，大量沉积于禽蛋蛋黄内，对于畜禽肠道中PiT-1的磷感受功能具有良好的抑制作用，可提高畜禽肠道对磷的吸收效率，有效的提高血清中磷含量，减少饲料中无机磷矿的添加量，降低畜禽养殖过程中磷的排泄量，节约资源、保护环境。

为了实现上述技术效果，本公开提供以下技术方案：

本公开第一方面，提供如SEQ ID NO:1-SEQ ID NO:32所述序列作为抗原表位的应用。

优选的，SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所述序列作为抗原表位的应用。

本公开研究过程中，首先预测出人和畜禽PiT-1蛋白的抗原表位，这些抗原表位均位于细胞膜外侧，其氨基酸序列见表1，有望作为人或畜禽PiT-1免疫抑制剂设计位点。

表1 PiT-1蛋白抗原表位筛选示例