[发明专利]包载基因药物的靶向EpCAM脂质体纳米颗粒及制备方法、应用

说明书

本发明涉及一种具有EpCAM主动靶向功能的可包载基因药物的脂质体纳米颗粒的制备方法，包括步骤：(1)将DOTAP、HSPC、Chol、DSPE‑PEG2000‑COOH按预设配比共同溶于有机溶剂中；(2)减压蒸发除去有机溶剂，得到透明均匀的脂质体膜；(3)使脂质体膜水化，并挤出成膜，形成空白脂质体纳米颗粒；(4)将EDC、NHS加入所述的空白脂质体纳米颗粒中，以活化所述的空白脂质体纳米颗粒表面的羧基，将NH₂‑修饰的EpCAM核酸适配体储存液加入活化的空白脂质体纳米颗粒中，孵育，以将所述的空白脂质体纳米颗粒进行EpCAM核酸适配体修饰，而获得所述的脂质体纳米颗粒。

技术领域

本发明涉生物医药技术领域，具体涉及一种可包载基因类药物的纳米颗粒，其具有EpCAM靶向性。

背景技术

微小RNA(microRNA/miRNA/miR)代表了一类新的小型非编码RNA，其通过与靶mRNA的3’非翻译区(UTR)中的互补序列的碱基配对来转录后调控基因表达。功能研究表明miRNA几乎控制着每个生物学过程，并且它们的异常表达导致疾病状态，如癌症。然而，与其他基因类药物相同，miRNA模拟物的亲水性质，对血清中核酸酶降解的敏感性，渗透性差和肿瘤细胞吸收减少是实现其有效的体内递送的主要障碍。

脂质体是目前最成功的药物输送载体，美国食品和药品管理局(FDA)已经批准约30多种脂质体系统进入临床疾病的治疗。脂质体载药以前的机理主要也是通过肿瘤组织的EPR效应。为了实现更特异的靶向，核酸适配体功能化脂质体是更佳选择。

上皮特异性黏附分子(EpCAM)是一种单次跨膜蛋白，于1979年由Herlyn等在结肠癌中发现，被认为是人类结肠癌组织的主要肿瘤相关抗原，可作为结肠癌靶向给药的潜在靶点。

因此，通过构建靶向EpCAM的脂质体纳米药物传递系统包载miRNA等基因类药物，可有效增加其在EpCAM高表达肿瘤部位的积蓄，提高其体内稳定性，以更好地发挥肿瘤治疗效果。

发明内容

针对现有的医药技术缺陷和不足，本发明借助DSPE-PEG2000-COOH、DOTAP、HSPC以及Chol的组合和配比，将具有靶向功能的EpCAM核酸适配体修饰于脂质体纳米颗粒上，实现了具有EpCAM靶向功能的、可载基因药物的脂质体纳米颗粒的制备。制备工艺简单，可提高肿瘤治疗效率，对基因药物用于靶向治疗EpCAM高表达的癌症治疗有重要意义。

本发明提供了一种具有EpCAM主动靶向功能的可包载基因药物的脂质体纳米颗粒，所述的脂质体纳米颗粒包括组分DOTAP、HSPC、Chol合DSPE-PEG2000-COOH，且所述的脂质体纳米颗粒的表面经EpCAM核酸适配体修饰。

本发明提供一种具有EpCAM主动靶向功能的可包载基因药物的脂质体纳米颗粒的制备方法，所述的靶向脂质体纳米颗粒粒径均匀，低毒性，具有长循环效果，能增动肿瘤靶向富集作用和提高肿瘤治疗效果；所述的制备方法简单、重复性高，对基因药物的临床应用有重要意义。

为实现本发明的目的，采用以下制备方法，其具体步骤如下：

(1)将DOTAP、HSPC、Chol、DSPE-PEG2000-COOH按预设配比共同溶于有机溶剂中；

(2)减压蒸发除去有机溶剂，得到透明均匀的脂质体膜；

(3)使所述的脂质体膜水化，并挤出成膜，形成空白脂质体纳米颗粒(NPs)；

(4)将EDC、NHS加入所述的空白脂质体纳米颗粒中，以活化所述的空白脂质体纳米颗粒表面的羧基，将NH₂-修饰的EpCAM核酸适配体储存液加入活化的空白脂质体纳米颗粒中，孵育，以将所述的空白脂质体纳米颗粒进行EpCAM核酸适配体修饰，而获得所述的具有EpCAM主动靶向功能的可包载基因药物的脂质体纳米颗粒(ANPs)。