[发明专利]乳胶增强免疫比浊法测定粪胰弹性蛋白酶-1

说明书

本发明首次利用将单克隆抗体结合到乳胶增强免疫比浊法中，用于人粪便中胰弹性蛋白酶1的检测，用于诊断慢性胰腺炎或者胰腺外分泌功能障碍，与现有技术相比，本申请采用特异性识别胰弹性蛋白酶1的单抗，显著提高了检测灵敏度和特异性，具有一定的临床应用前景。

技术领域

本发明属于医学检验和体外诊断技术领域，涉及一种测定粪便中胰弹性蛋白 酶1的试剂盒，具体地说涉及一种利用乳胶增强免疫比浊法定量测定人体粪便中 胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。

背景技术

粪胰弹性蛋白酶1(Fecal elastase 1,FE-1)是由外分泌腺分泌的一种胰腺内 切蛋白酶，经十二指肠乳头排入十二指肠，其浓度降低时可特异性地提示发生慢 性胰腺炎或胰腺外分泌功能不全的情况。粪胰弹性蛋白酶1在肠道内具有稳定性， 通过检测其在粪便中的含量可间接反映胰腺外分泌的功能，这种方法安全、无创 且不受胰酶替代治疗的影响。但是目前常用的免疫层析法检测粪胰弹性蛋白酶1 的方法存在准确性和特异性低的问题，且操作复杂，检测不便。

当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一 部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比 浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗 体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对 抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射。但是经典的免疫比浊法，少量的小的抗 原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间：如形成较大的复合物，则抗原 和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。于是发展了现在广泛应用于生化 分析仪的乳胶增强免疫比浊法(PETIA)。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结 合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。

乳胶增强免疫比浊法(Latex-enhanced turbidimetric immunoassay)是一种 体液蛋白均相透射免疫比浊检测方法，原理是在纳米级高分子乳胶微球的表面交 联多克隆抗体，当交联有抗体的微球与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一 起，改变了反应液的透光性能；反应液透光性能(即吸光度)的改变与被测抗原的 浓度有较强的相关性，在一定范围内可以反映被测抗原的浓度。其具有如下优点： 1、省时省力：在均相反应体系中进行抗原、抗体反应，利用全自动生化分析仪 直接测定反应液的吸光度值，几分钟就能获得结果，省却酶联免疫法反复孵育和 洗板等烦琐操作步骤；2、稳定准确：操作步骤的简化也相应地避免了许多人为 操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰，稳定性和重复性都较好，能较真实 地反映被测人体血液或粪便排泄物中胰弹性蛋白酶1的含量；3、应用广泛：乳胶增强免疫比浊法的灵敏度足以检测到胰弹性蛋白酶1的下限值，可完全满足临 床检测要求，明显优于免疫层析法(胶体金)。

随着检验医学的发展，对于低浓度检测物质的检测越来越多，检测物质的浓 度正在从μg/mL级别下降至ng/mL级别，对于诊断试剂的灵敏度要求也越来越 高，对于传统的乳胶增强免疫比浊法来说需要进一步的提升检测的灵敏度，以适 应检测要求，传统的提升检测灵敏度的方法包括采用亲和力更高的抗体，采用更 大颗粒，稳定性更好的乳胶颗粒，选用更好的促进抗原抗体反应的缓冲液体系等， 但是这些都会增加试剂的成本，如何提升面对ng/mL级别被分析物的分析灵敏 度和精密度，同时不增加成本一直是试剂开发的一大挑战。

现有技术中，目前尚无利用乳胶增强免疫比浊法测定人体粪便中胰弹性蛋白 酶1的相关试剂盒及检测方法。且目前的乳胶增强免疫比浊法是基于多克隆抗体， 并未有记载基于单克隆抗体的检测方法。

发明内容

为此，本发明正是要解决上述技术问题，从而提出一种利用乳胶增强免疫比 浊法定量测定人体粪胰弹性蛋白酶1的试剂盒及其应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：