[发明专利]一种基因Gal1265的制备方法及其用途

说明书

本发明公开了一种基因Gal1265的制备方法及其用途。是将Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5接种至人工海水培养基中，培养后提取菌株基因组DNA；再以该菌株基因组DNA为模板，SEQ ID NO:3和4为上下游引物，进行扩增得到所述基因Gal1265。基因Gal1265和/或含有基因Gal1265的载体具有在高盐状态下寡聚糖水解的功能。

技术领域

本发明涉及基因领域，尤其涉及一种基因Gal1265的制备方法及其用途。

背景技术

琼脂由D-半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖(AHG)，通过β-1-4和α-1-3键交替连接组成。琼脂衍生的寡糖分为琼寡糖(AOS)和新琼寡糖(NAOS)。AOS的非还原末端是半乳糖单元，而NAOS的非还原末端是AHG单元。

最近开发了用于琼脂水解酶促水解与弱酸预水解相结合的方法。α-1-3糖苷键预先被弱酸裂解，将琼胶降解为以半乳糖为非还原末端的偶数AOS。然后通过β-琼胶酶和新琼二糖水解酶将AOS水解成单糖。在琼胶降解中，琼脂的降解可分为β-琼胶降解途径(β-agarolytic pathway)和α-琼胶降解途径(α-agarolytic pathway)，两种降解途径最终都可以将琼胶降解为可发酵单糖，从而被微生物利用。在β-琼胶降解途径中，琼胶被β-琼胶酶降解为新琼二糖，新琼二糖在新琼二糖水解酶的作用下被降解为可被微生物利用的D-半乳糖和3,6-内醚-α-L-半乳糖。在α-琼胶降解途径中，琼胶在α-琼胶酶的作用下被降解成琼二糖。最近研究发现，琼二糖可进一步被β-半乳糖苷酶降解为D-半乳糖和3,6-内醚-α-L-半乳糖，从而进入相关代谢途径被利用。

β-半乳糖苷酶(β-galactosidase，β-Gal)又称乳糖酶(Lactase)，可以水解糖苷键生成葡萄糖和半乳糖。β-半乳糖苷酶具有催化乳糖水解和转糖苷两种功能，特别是利用其转糖苷作用生成低聚半乳糖，已成为低聚功能性糖的开发和利用的热点。最近研究发现β-半乳糖苷酶参与琼脂降解，来源于海洋细菌Vibrio sp.EJY3和Agarivorans gilvusWH0801的β-半乳糖苷酶能够在AOSs的非还原末端切割第一个β-1,4-糖苷键以产生D-半乳糖和相应的NAOSs。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基因Gal1265的制备方法及其用途。

为实现上述目的，本发明提供一种基因Gal1265的制备方法，其特征在于，从海水中制备得到。

进一步，将Pseudoalteromonas carrageenovora ASY5接种至人工海水培养基中，培养后提取菌株基因组DNA；再以该菌株基因组DNA为模板，SEQ ID NO:3和4为上下游引物，进行扩增得到所述基因Gal1265。

进一步，所述扩增的程序为：95℃，5min；94℃，15s，56℃，15s，72℃，3min20s，30个循环；72℃，10min。

进一步，所述人工海水培养基的配置方法为，将牛肉浸膏和胰蛋白胨在蒸馏水中溶解后用NaOH调pH至7.8，加热煮沸10min，冷却后再次加NaOH调pH至7.3，然后和人工海水混合，灭菌即可；其中牛肉浸膏、胰蛋白胨、蒸馏水、人工海水的用量比例为：10g：10g：250mL：750mL；

所述人工海水为NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂·6H₂O、NaHCO₃、MgSO₄·7H₂O和蒸馏水组成，其中NaCl、KCl、CaCl₂、MgCl₂·6H₂O、NaHCO₃、MgSO₄·7H₂O和蒸馏水的用量比例为：37.51g：1.03g：1.61g：6.4g：0.15g：4.67g：1000mL。