[发明专利]闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗原表位肽及其应用

说明书

本申请公开了一种闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗原表位肽及其应用。所述特异性抗原表位肽包含SEQ ID No.1的第323‑334位所示氨基酸序列，其制备得到的抗原所产生的抗体仅能识别闭锁蛋白31kDa降解片段，不能识别闭锁蛋白55kDa降解片段和未降解闭锁蛋白，具有特异性好，检测限低的优点。本发明为超早期、快速、高效测定急性缺血性脑卒中病人血清31‑kDa闭锁蛋白片段水平，预测急性缺血性脑卒中再通治疗脑出血，提供了相应的检测新技术。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体说是一种闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗原表位肽及其应用。

背景技术

目前临床上，无论CT(computed Tomography，电子计算机断层扫描)，还是MRI(Magnetic Resonance Imaging，磁共振成像)，对于溶栓前血脑屏障的损伤程度，都无法实现准确而又快速的测定。曾被寄予厚望的几个血清学标志物(包括MMP-9和cFn)，不但不是血脑屏障的结构蛋白，且其血清水平还易受其它因素影响，总而言之，难以准确反映血脑屏障损伤程度。

闭锁蛋白(即Occludin蛋白)是形成血脑屏障“封条”作用的关键分子之一。大量研究表明，闭锁蛋白降解片段的产生，标志着血脑屏障受损的程度严重。我们研究发现，缺血2小时即可引起脑微血管内皮细胞的闭锁蛋白快速降解；在动物模型以及临床试验中均发现：1)在脑缺血发生后的4.5小时内，外周血中可先后检出55kDa和31kDa两种不同大小的闭锁蛋白降解片段。2)缺血后2小时，外周血中即可发现55kDa片段水平的升高，但其血清正常基线水平(即脑缺血前)也高，且上升速度缓慢。3)缺血后4小时，外周血中即可发现31kDa片段水平骤然大幅升高，其血清正常基线水平(即脑缺血前)较低，呈现“全或无”样的阈值变化效应(文献：Rong Pan et al.Blood Occludin Level as a Potential Biomarker forEarly Blood Brain Barrier Damage Following Ischemic Stroke.Sci Rep.2017；7:40331)。因此，闭锁蛋白31kDa降解片段可以作为评价溶栓前血脑屏障损伤程度的生物标志物。超早期、快速、高效测定急性缺血性脑卒中病人血清闭锁蛋白31kDa降解片段水平，可对预测急性缺血性脑卒中再通治疗脑出血提供参考。

发明内容

本发明的目的在于提供一种闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗原表位肽及其应用，由该特异性抗原表位肽制备得到的抗原所产生的抗体仅能识别闭锁蛋白31kDa降解片段，不能识别闭锁蛋白55kDa降解片段和未降解闭锁蛋白，具有特异性好，检测限低的优点。

一方面，本发明提供了一种闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗原表位肽，其包含SEQ ID No.1的第323-334位所示氨基酸序列；

所述闭锁蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述闭锁蛋白31kDa降解片段的氨基酸序列如SEQ ID No.1的第321-522位所示。

另一方面，本发明提供了一种闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗原，由权利要求1所述的特异性抗原表位肽与载体蛋白偶联制备得到。

另一方面，本发明提供了一种闭锁蛋白31kDa降解片段的特异性抗体，是由所述的特异性抗原制备得到的单克隆抗体或多克隆抗体。

另一方面，本发明提供了所述的特异性抗原表位肽、所述的特异性抗原、或所述的特异性抗体在制备用于检测闭锁蛋白31kDa降解片段的产品(试剂、试剂盒、试纸条等)中的应用；

优选的，所述检测的样本为外周血血清，更优选的，所述外周血来源于急性缺血性脑卒中患者。

在一种具体的实施方式中，本发明提供了一种检测闭锁蛋白31kDa降解片段的胶体金免疫层析试纸，所述试纸包括：胶体金标记的所述的特异性抗体、检测线和质控线；