[发明专利]基于2-苯乙烯基吲哚盐类衍生物长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针及其应用

说明书

一种基于2‑苯乙烯基吲哚盐类衍生物长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针及其应用，该荧光探针L的结构式为：该荧光探针L是以2‑苯乙烯基吲哚盐为底物，与4‑氯‑7‑硝基苯并‑2‑氧杂‑1,3‑二唑、三乙胺，通过温和简单的反应，获得具有长波发射的荧光探针L。该荧光探针L合成步骤简单，长波长发射，响应时间较短，在含水介质中只对Cys/Hcy的有识别，并可区分检测Cys/Hcy，具有高灵敏性，可应用在细胞中作为非疾病诊断和非疾病治疗目的的检测。

技术领域

本发明涉及一种基于2-苯乙烯基吲哚盐类衍生物长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针及其应用。

背景技术

半胱氨酸(Cys)，高半胱氨酸(Hcy)和还原型谷胱甘肽(GSH)是生物体中常见的生物硫醇，并且在各种生理和病理过程中起重要作用，其中Cys是GSH的前体，参与蛋白质合成，解毒和代谢。Hcy已被确定为许多疾病的独立危险因素，其微小升高(超过15μM)可导致严重的同型高半胱氨酸血症。GSH作为细胞内最丰富的硫醇，在对抗氧化应激和维持氧化还原稳态中起重要作用。目前检测三种生物硫醇常见的经典方法包括电化学法、比色法、亚甲蓝法和气相色谱法。与传统方法相比，荧光分析技术以其成本低、操作简单、灵敏度高、实时无损生物成像等优点受到人们的广泛关注。

近年来，科研人员设计和开发了许多用于体外和体内检测生物硫醇(包括Hcy、Cys和GSH)的荧光探针，具有较好的选择性，如Org.Biomol.Chem.,(2019),17,1436-1441；Tetrahedron,(2017),73,6651-6656，但其合成路线相对复杂；Dyes Pigm.,(2018),158,151-156；New J.Chem.,(2018),42,18172-18181,但其发射波长较短；Biosensors andBioelectronics,(2016),81,341-348；CN106588912；不能区分识别Cys/Hcy；Talanta,(2016),146,41-48；Analyst,2019,144,3676-3684；不能快速检测。可见，现有报道的探针均有一定的缺陷，同时Hcy、Cys和GSH由于结构和反应能力的相似性，将它们区分检测，仍然是一项具有挑战性的任务。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于2-苯乙烯基吲哚盐类衍生物长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针及其应用，该荧光探针合成步骤简单，长波长发射，响应时间较短，在含水介质中只对Cys/Hcy的有识别，并可区分检测Cys/Hcy，具有高灵敏性，可应用在细胞中作为非疾病诊断和非疾病治疗目的检测。

本发明的技术方案是：

一种长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针，该荧光探针L是基于2-苯乙烯基吲哚盐类衍生物，结构式如下：

进一步的，所述长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针，其具体合成步骤如下：

以CH₂Cl₂为溶剂，将化合物14-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑(Cl-NBD)、三乙胺按照摩尔比1:(1～2)：(0.1～0.5)进行投料，室温下搅拌6小时～12小时，反应结束后加水，萃取干燥，得到粗产物，用硅胶柱色谱法进行纯化，用甲醇和二氯甲烷作为洗脱剂进行分离，得到荧光探针L

所述甲醇和二氯甲烷的体积比为1:50～1:100。

一种长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针在区分检测Cys和Hcy中的应用，其特殊之处在于：体积比为2:8的THF与PBS的缓冲溶液中对Cys和Hcy进行检测，所述应用为非疾病诊断和非疾病治疗目的。

一种长波发射可区分检测Cys/Hcy荧光探针在区分检测Cys和Hcy中的应用，其特殊之处在于：在pH＝7.4、体积比为2:8的THF与PBS缓冲溶液中，用荧光探针L检测时，30秒内在592nm处的荧光强度明显增强，说明存在Cys。