[发明专利]一种L-苏氨酸醛缩酶及其在对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用有效
申请号: | 201910838613.5 | 申请日: | 2019-09-05 |
公开(公告)号: | CN110577948B | 公开(公告)日: | 2020-12-25 |
发明(设计)人: | 林娟;王力超;许炼;陈承滔;赖凌燕 | 申请(专利权)人: | 福建昌生生物科技发展有限公司 |
主分类号: | C12N9/88 | 分类号: | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/04;C12R1/19 |
代理公司: | 福州旭辰知识产权代理事务所(普通合伙) 35233 | 代理人: | 程春宝 |
地址: | 350200 福建省福州市长*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 苏氨酸 醛缩酶 及其 甲砜基苯 丝氨酸 合成 中的 应用 | ||
1.L-苏氨酸醛缩酶在(2S, 3R)-对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用,其特征在于:
L-苏氨酸醛缩酶的编码基因的核心序列如SEQID NO:2所示;通过基因工程构建含L-苏氨酸醛缩酶的编码基因的重组大肠杆菌细胞为L-苏氨酸醛缩酶全细胞;
将L-苏氨酸醛缩酶全细胞作为催化剂用于(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸不对称合成反应,所述合成反应的体系包括:对甲砜基苯甲醛、甘氨酸、磷酸吡哆醛、30%乙腈(v/v)的PBS缓冲液、以及L-苏氨酸醛缩酶全细胞;各原料的质量摩尔浓度之比为对甲砜基苯甲醛∶甘氨酸∶磷酸吡哆醛=1-1.5∶2-3∶0.0001-0.0002,重组大肠杆菌全细胞浓度为10-13mg/mL;25℃-35℃下反应4-12h。
2.根据权利要求1所述的L-苏氨酸醛缩酶在(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用,其特征在于,所述L-苏氨酸醛缩酶全细胞的制备方法包括:
S1、构建包含所述L-苏氨酸醛缩酶编码基因序列的重组表达质粒载体;
S2、将步骤S1中的重组表达质粒载体转化至大肠杆菌的感受态细胞中,并培养过夜;
S3、收集步骤S2中培养后的大肠杆菌菌体,即获得所述的L-苏氨酸醛缩酶全细胞。
3.根据权利要求2所述的L-苏氨酸醛缩酶在(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用,其特征在于,所述(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸不对称催化合成反应体系的配置方法为:在反应容器中先加入磷酸盐缓冲液,然后分别称取对甲砜基苯甲醛、甘氨酸、磷酸吡哆醛并依次投入反应瓶中,充分混匀后,再加入重组大肠杆菌的全细胞,振荡反应。
4.根据权利要求3所述的L-苏氨酸醛缩酶在(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸合成中的应用,其特征在于,所述L-苏氨酸醛缩酶不对称催化合成(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸的反应体系达到预定的反应时间后,将反应液在8000-10000rpm离心3-6min,除去细胞沉淀,收集的上清液即为含有(2S,3R)-对甲砜基苯丝氨酸的催化产物。
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