[发明专利]一种食用油中4种多环芳烃化合物的快速提取净化方法及其检测应用

权利要求书

1.一种食用油中4 种多环芳烃化合物的快速提取净化方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取待测食用油样品，依次加入提取液和脂肪酶，于37±2℃恒温震荡酶解1.5-2.5h后，加入碳酸钾和乙醇，或碳酸钠和乙醇，涡旋混匀，其中所述的提取液的配制方法如下：将磷酸二氢钾溶于水中配制成浓度为0.108kg/L的磷酸二氢钾溶液，用氢氧化钾调pH至8.0；

（2）然后加入正己烷和水，震荡4-6 min，以4000-5000 r/min离心4-6 min，分离得到上层有机相和下层水相；

（3）取下层水相按步骤（2）方法，重复萃取1次；合并两次萃取所得上层有机相部分，混匀，40℃旋蒸至干，用乙腈复溶，过滤膜，得到含有苯并[a]蒽、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽和苯并[a]芘4 种多环芳烃化合物的待测样品。

2.根据权利要求1所述的一种食用油中4 种多环芳烃化合物的快速提取净化方法，其特征在于：每克待测食用油样品中提取液的添加量为2.5 mL，脂肪酶的添加量为0.1g，碳酸钾的添加量为0.5g，乙醇的添加量为2.5mL，正己烷的添加量7.5 mL以及水的添加量为2.5mL。

3.根据权利要求2所述的一种食用油中4 种多环芳烃化合物的快速提取净化方法，其特征在于：步骤（1）中酶解时间为2 h。

4.一种食用油中4 种多环芳烃化合物的快速检测方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）样品前处理

A．称取待测食用油样品，依次加入提取液和脂肪酶，于37±2℃恒温震荡酶解1.5-2.5h后，加入碳酸钾和乙醇，或者碳酸钠和乙醇，涡旋混匀，其中所述的提取液的配制方法如下：将磷酸二氢钾溶于水中配制成浓度为0.108kg/L的磷酸二氢钾溶液，用氢氧化钾调pH至8.0；每克待测食用油样品中提取液的添加量为2.5 mL，脂肪酶的添加量为0.1g，碳酸钾的添加量为0.5g，乙醇的添加量为2.5mL；

B．然后加入正己烷和水，震荡4-6 min，以4000-5000 r/min离心4-6 min，分离得到上层有机相和下层水相，每克待测食用油样品中正己烷的添加量为7.5 mL和水的添加量为2.5 mL；

C．取下层水相按步骤B方法，重复萃取1次；合并两次萃取所得上层有机相部分，混匀，40℃旋蒸至干，用乙腈复溶，过0.22µm微孔滤膜得到含有苯并[a]蒽、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽和苯并[a]芘4 种多环芳烃化合物的待测样品，备用；

（2）标准曲线制作

分别用乙腈配制苯并[a]蒽、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽和苯并[a]芘的一系列标准溶液，每一种多环芳烃化合物的系列标准溶液浓度均为0.1 ng/mL，0.5 ng/mL，1.0 ng/mL，2.0 ng/mL，5.0 ng/mL，以浓度为横坐标，仪器响应值为纵坐标，制作标准曲线；

（3）液相色谱-荧光检测

液相条件：Dikma Plus C18色谱柱或Hypersile Gold C18色谱柱，柱温40℃，流动相A：水，流动相B：乙腈，流速：1.0 mL/min，梯度见下表1：

表1 HPLC洗脱程序

；

荧光检测器，检测波长见下表2：

表2 4种多环芳烃的荧光检测参数

；

（4）待测样品浓度计算：

样品中4种多环芳烃待测物的含量根据如下计算公式得到：X=C*V/m，

式中：X－试样中某一待测多环芳烃化合物含量，单位为μg/kg；

C－试样处理液中该多环芳烃化合物浓度，根据该多环芳烃化合物的基质标准曲线计算得到，单位为μg/L；

V— 定容体积，单位为mL；

m－试样体积或质量，单位为g。

5.根据权利要求4所述的一种食用油中4 种多环芳烃化合物的快速检测方法，其特征在于：步骤（1）中酶解时间为2 h。