[发明专利]一种检测犬三大常见病原体感染的引物、试剂盒及应用

说明书

一种检测犬三大常见病原体感染的引物、试剂盒及应用，其包括犬细小病毒(Canine Picornavirus，CPV)、犬冠状病毒(Canine Coronavirus，CCV)和犬瘟热病毒(Canine Distemper Virus，CDV)共三个引物组，每组都由F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、LF引物、LB引物6条引物组成，序列因所针对的病原体而异。检测试剂盒包括CPV、CCV和CDV共三种检测试剂，还有阴性对照和预处理液A和预处理液B；试剂盒的使用方法是蘸取患犬样本(检测CPV和CCV取粪便或肛拭子，检测CDV取眼或鼻的分泌物)，处理后将其放入各检测试剂中在65℃中恒温下进行反应，完成后根据颜色变化判定阴阳性。本发明是基于LAMP技术，特异性扩增病原体基因片段，可在60分钟内完成采样和检测，用最易掌握的操作方式，实现高精度的检测结果。

技术领域

本发明属于生物领域，特别涉及一种检测犬三大常见病原体感染的引物、试剂盒及应用。

背景技术

目前宠物病原体检测主要有胶体金试纸、PCR检验、第三方检测服务三种方式，胶体金试纸是最常用的技术。胶体金试纸技术发展较早，操作最简单，因此目前市场占有率最高，约占病原体检验市场的7成左右，代表公司为行业巨头爱德士、林特医药等。但是由于这一技术精确度低，阳性符合率仅为6成左右，精确度已逐渐不能满足市场需求，且可检验病原体种类并不完善，如最常见的犬三大常见病原体感染不能检测等，故其市场份额在逐年紧缩。

PCR检验是近两年开始由人类医疗市场进入宠物医疗市场的，其最大的优势是精确度高，但是其器械成本也十分高，单台仪器设备的价格均在5万以上，操作也十分复杂，普通宠物医生很难进行操作。并且，安装其设备需要自建实验空间，并需保证实验环境的通风性良好，否则易产生假阳性，而大多宠物医院并不具备安装条件。因以上原因，现有PCR检验技术的院内检测的推广并不好，只有少数连锁宠物医院龙头企业的中心医院有配备。

发明内容

本发明的目的之一在于克服现有技术的不足，提供一种检测犬三大常见病原体感染的引物、试剂盒及应用。本发明是基于LAMP技术，特异性扩增病原体基因片段，可在60min内完成采样-检测过程，用最易掌握的操作方式，实现高效、高精度的检测结果，从而达到精准检测的目的，并且本发明可以在感染病原体的潜伏期阶段及时检测，增加患病个体治愈率。与现有技术相比，本发明同时具备精确度高、操作便捷、成本低、无操作环境依赖等特点。

本发明的一种检测犬三大常见病原体感染的引物，其在于包括CPV引物组、CCV引物组和CDV引物组三个引物组，每组都由F3引物、B3引物、FIP引物、BIP引物、LF引物、LB引物6条引物组成，序列因所针对的病原体而异；其中CPV引物组包括外引物对CPV-F3和CPV-B3，内引物对CPV-FIP和CPV-BIP，以及环引物对CPV-LF和CPV-LB；CCV引物组包括外引物对CCV-F3和CCV-B3，内引物对CCV-FIP和CCV-BIP，以及环引物对CCV-LF和CCV-LB；CDV引物组包括外引物对CDV-F3和CDV-B3，内引物对CDV-FIP和CDV-BIP，以及环引物对CDV-LF和CDV-LB；详细序列如下所示：

CPV-F3 AATCAAGCAGCAGATGGT

CPV-B3 TGGATCTGTTGGTAGCAATA

CPV-FIP TCAGGTGTTTCTCCTGTTGTAGTAGATCCAAGATATGCATTTGGTAGA

CPV-BIP AGATACAGGAAGATATCCAGAAGGATTATCATTTGTTACAGGAAGGTT

CPV-LF GTTTTTTGACCATGTTG

CPV-LB ATTGGATTCAAAATATTAACTTT

CCV-F3 TTGAAGGTGTGCCAACTG