[发明专利]石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器制备及使用方法

说明书

本发明公开了石墨化碳‑壳聚糖CA125免疫传感器制备及使用方法，制备方法包括以下步骤：(1)制备石墨化碳；(2)电极预处理；(3)制备石墨化碳‑壳聚糖复合溶液；(4)制备石墨化碳‑壳聚糖修饰电极；(5)制备石墨化碳‑壳聚糖CA125免疫传感器。使用方法包括以下步骤：(1)对石墨化碳‑壳聚糖CA125免疫传感器进行电化学行为测试，得出石墨化碳‑壳聚糖CA125免疫传感器对CA125的拟合线性回归方程及检出限；(2)将待测浓度的样品涂到石墨化碳‑壳聚糖CA125免疫传感器上，利用三电极体系进行检测，并计算CA125抗原的浓度。该石墨化碳‑壳聚糖CA125免疫传感器制备步骤简单、成本低廉，检测CA125含量时灵敏度高、抗干扰性强、使用方便、检测时间短。

技术领域

本发明涉及CA125免疫传感器制备及使用方法，更具体地，涉及石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器制备及使用方法。

背景技术

CA125是一种用于检测上皮卵巢癌细胞的特异性和关键肿瘤标志物之一。最近几年来，电流型无标记免疫分析方法因其无标记免疫分析的高灵敏度引起了越来越多的研究兴趣，该分析方法基于抗原抗体的特异性结合，在电极表面形成的免疫复合物阻碍电化学活性探针与电极之间的电子传输，从而引起电活性物质峰电流下降，利用这种电流的变化可实现定量检测。目前无标记电化学传感一般利用传统电化学探针进行检测，但传统电化学探针检测灵敏度不高，未能充分发挥电流型无标记免疫分析方法高灵敏度的优势。

发明内容

发明目的：本发明的目的是提供一种操作简单、成本低、灵敏度高的石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器的制备方法，本发明的另一目的是提供该免疫传感器的使用方法。

技术方案：本发明所述石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器制备方法，包括以下步骤：

(1)石墨化碳的制备：利用苯胺、植酸以及引发剂制备获得聚苯胺凝胶，并进行碳化得到石墨化碳；

(2)电极预处理；

(3)制备石墨化碳-壳聚糖复合溶液；

(4)石墨化碳-壳聚糖修饰电极的制备：将步骤(3)得到的石墨化碳-壳聚糖复合溶液修饰在步骤(2)预处理后的电极表面，干燥后得到石墨化碳-壳聚糖修饰电极，

(5)石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器的制备：将CA125抗体滴加到步骤(4)中得到的石墨化碳-壳聚糖修饰电极上，然后将电极放入牛血清蛋白(BSA)溶液中，取出后即得到石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器。

其中，利用活化材料对步骤(1)中得到石墨化碳进行活化，得到三维分层多孔石墨化碳；其中，活化材料含有NaOH或KOH，活化材料中所含羟基能够使石墨化碳最大程度地多孔化。优选的，活化材料与石墨化碳的质量比范围为1:1～5:1，活化材料若少于石墨化碳则活化程度低，活化材料过多则会产生原材料的浪费。进一步地，活化温度范围为500℃～800℃，在此温度范围内，石墨化碳活化反应进行彻底，同时不产生能源的浪费，石墨化碳比表面积和孔结构得到扩大，活化效果明显。

其中，步骤(1)中引发剂、苯胺、植酸的摩尔比为2～3:2～7:1，能够使得苯胺与植酸形成较为稳定的凝胶，便于石墨化碳的制备。

其中，步骤(1)中碳化温度为400℃～900℃，此温度能够使植酸分解，保证碳化过程的进行，顺利制备出石墨化碳。

其中，引发剂为硫酸铵溶液或过氧化氢溶液，这两种引发剂不含金属离子，氧化能力强，便于苯胺聚合，后处理方便。

本发明所述的石墨化碳-壳聚糖CA125免疫传感器的使用方法包括以下步骤：