[发明专利]一种分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法

说明书

一种分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法，所述方法为：在分液漏斗中加入羟丙基‑β‑环糊精水溶液、正己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相作为固定相，下相作为流动相；取齐墩果酸和熊果酸混合物用固定相和流动相的混合溶液溶解，得到样品溶液；取固定相注满逆流色谱仪的分离柱，开启速度控制器，使分离柱正转，注入流动相，等到柱尾端流出流动相时，表明两相已达到平衡，这时将样品溶液注入分离柱，紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，分别合并含目标物质的洗脱液，经后处理得到齐墩果酸、熊果酸；本发明操作简便，高效快捷，溶剂消耗少，齐墩果酸与熊果酸纯度高，且分离过程中样品回收率高。

(一)技术领域

本发明涉及一种分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法

(二)背景技术

齐墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic acid)均为五环三萜类化合物，在自然界中分布很广，两者互为同分异构体，分子式为C₃₀H₄₈O₃，仅有一个甲基的位置不同，不易分离。它们在植物中广泛存在而且总是同时存在于同种植物。基于齐墩果酸和熊果酸相近的化学结构，二者通常表现出相同或相似的疗效和生物效应。他们具有抵抗化学致癌物诱导的急性肝损伤，慢性肝纤维和肝硬化的显著保肝作用已广为人知。齐墩果酸和熊果酸的其他许多药理作用已经被报道，如抗氧化，抗炎，抗肿瘤，抗HIV，抗菌，保胃和潜在的抗肥胖作用。鉴于三萜酸类化合物在中草药中的自然丰度低和没有紫外吸收或紫外吸收极低的特点，对齐墩果酸以及熊果酸的研究引起了国内外研究者的广泛关注。

逆流色谱(countercurrent chromatography)，是一种连续的不需要固体载体的现代色谱分离技术，相比高效液相色谱而言，可避免固相吸附带来的污染和样品损失，且进样量大，运行成本低，是分离同分异构体的一种理想的制备色谱技术。

(三)发明内容

本发明的目的是提供一种应用高速逆流色谱分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法，利用环糊精对齐墩果酸和熊果酸有不同的识别作用从而将快速两者分开，具有更强的目的性，快捷高效，工艺简单。

本发明的技术方案如下：

一种分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法，所述方法为：

(1)在分液漏斗中加入羟丙基-β-环糊精水溶液、正己烷和乙酸乙酯组成的混合溶剂体系，充分振摇后静置分层，取上相作为高速逆流色谱的固定相，下相用磷酸氢二钠-磷酸缓冲液调节pH至2～8(优选6～7)后作为流动相；

所述羟丙基-β-环糊精水溶液的浓度为0.05～0.30mol/L，优选0.1～0.15mol/L；

所述混合溶剂体系中，羟丙基-β-环糊精水溶液、正己烷、乙酸乙酯的体积份数分别为10份、8.5～9.5份、0.5～1.5份，优选分别为10份、9份、1份；

(2)取齐墩果酸和熊果酸的混合物用固定相和流动相的混合溶液溶解，得到样品溶液；

所述固定相和流动相的体积比为1：1；

所述固定相和流动相的混合溶液的体积用量以齐墩果酸和熊果酸的混合物的质量计为0.3～0.7mL/mg；

(3)取固定相注满高速逆流色谱仪的分离柱，开启速度控制器，使分离柱正转，在500～1000r/min转速下，以0.5～5mL/min的流速注入流动相，等到柱尾端流出流动相时，表明两相已达到平衡，这时将样品溶液注入分离柱，波长200～254nm的紫外检测器检测，用自动部分收集器收集洗脱液，分别合并含目标物质齐墩果酸、熊果酸的洗脱液，洗脱液用10wt％HCl酸化至pH＝2-3，然后用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥、过滤后减压蒸去溶剂后得到齐墩果酸、熊果酸；

所述样品溶液可通过进样圈注入或通过泵泵入逆流色谱仪；