[发明专利]一种鸭星状病毒卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明公开了一种鸭星状病毒I型卵黄抗体的制备方法，其包括以下步骤：(1)利用鸭星状病毒I型灭活疫苗免疫育龄母鸡，获得高免鸡蛋；(2)收集高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；(3)将步骤(2)得到的蛋黄液与纯化水以1:1～3的体积比混合，搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为0.8～2.5％的柠檬酸及2～4％的聚阴离子纤维素，充分搅拌后，1～5℃放置3～6h，1～5℃离心，收集上清液；(4)将步骤(3)收集的上清液过滤除菌后即得卵黄抗体液。本发明所公开的鸭星状病毒I型卵黄抗体的制备方法，步骤简单，效率及得率高，添加少，经济适用。

技术领域

本发明涉及一种鸭星状病毒I型卵黄抗体的制备方法。

背景技术

鸭星状病毒I型引起的死亡率与雏鸭日龄有关，若感染1～2周龄鸭，死亡率可达50％，若疾病发生于4～6周龄鸭，死亡率为10～25％。对成年蛋鸭也有致病性，可导致产蛋下降，所引起的死亡率一般不超过30％。因此目前该病已经成为严重影响养鸭场生产性能的重大疫病之一。目前尚没有鸭星状病毒疫苗上市，也没有相关的药物控制该病毒导致的疾病，其发生常给养鸭业造成重大经济损失。

卵黄抗体(IgY)是母禽被外来抗原刺激后，母禽血液中免疫球蛋白转移至其卵黄中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白，是在卵黄内所产生的特异性抗体，其浓度远高于血清，并具有高度稳定性和生物学活性，这使应用卵黄抗体防病治病成为可能。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种纯度、收率高，活性强、易于制备与应用且经济的鸭星状病毒I型卵黄抗体的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明公开一种鸭星状病毒I型卵黄抗体的制备方法，其包括以下步骤：

(1)利用鸭星状病毒I型灭活疫苗免疫育龄母鸡，获得高免鸡蛋；

(2)收集高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；

(3)将步骤(2)得到的蛋黄液与纯化水以1:1～3的体积比混合，搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为0.8～2.5％的柠檬酸及2～4％的聚阴离子纤维素，充分搅拌后，1～5℃放置3～6h，1～5℃离心，收集上清液；

(4)将步骤(3)收集的上清液过滤除菌后即得卵黄抗体液。

所述步骤(3)蛋黄液与纯化水以1:2的体积比混合；搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为1％的柠檬酸及3％的聚阴离子纤维素；低温放置温度为3℃，放置时间为4小时；低温离心条件为3℃11000r/min离心30分钟。

所述步骤(1)中的鸭星状病毒I型灭活疫苗，其为用传代细胞系LMH细胞生产的鸭星状病毒I型灭活疫苗。

所述步骤(2)蛋黄液的获得优选为：将高免鸡蛋用75％酒精进行表面消毒，分离出蛋黄，过60目尼龙筛去除卵黄膜和系带，然后置于胶体磨中研磨5min，即得蛋黄液。

本发明所公开的鸭星状病毒I型卵黄抗体的制备方法，步骤简单，效率及得率高。聚阴离子纤维素(Polyanionic cellulose，PAC)是由天然纤维素经化学改性而制得的水溶性纤维素醚类衍生物，是一种重要的水溶性纤维素醚，主要原料是精制棉，本身无药理作用，于生理无害。本发明技术人员意外发现，其与柠檬酸组合可在高浓度液体中有效去除蛋黄中的其它成分，蛋黄液不需要加入过多的纯化水稀释，制得的卵黄抗体液无需浓缩即有较高的浓度，极大的简化了操作流程，灭活、萃取、除杂质、无需浓缩一步到位。此制备方法耗时短，操作全程都维持在较低的温度，良好的保留了所制备卵黄抗体的活力，且极低浓度柠檬酸、PAC于生理无害，可应用于注射剂，无需额外除去残留即可使用。所得的卵黄抗体纯度高，活力好，并可在胃肠道中保持较好的活性，免疫方式除注射给药，也可与饲料混合口服给药，均可提供较好的免疫保护，经济适用。

具体实施方式