[发明专利]一种鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备方法

说明书

本发明公开了一种鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备方法，其包括以下步骤：(1)利用鸭坦布苏病毒灭活疫苗免疫育龄母鸡，获得高免鸡蛋；(2)收集高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；(3)将步骤(2)得到的蛋黄液与纯化水以1:1～3的体积比混合，搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为0.5～2％的柠檬酸及1～4％的聚阴离子纤维素，充分搅拌后，1～5℃放置3～6h，1～5℃离心，收集上清液；(4)将步骤(3)收集的上清液过滤除菌后即得卵黄抗体液。本发明所公开的鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备方法，步骤简单，效率及得率高，添加少，经济适用。

技术领域

本发明涉及一种鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备方法。

背景技术

鸭坦布苏病毒病，该病感染率高，死亡率低，主要以产蛋量急剧下降为主要特征，肉鸭，雏鸭主要症状为站立困难，步态不稳，给养禽业带来了巨大损失。鸭坦布苏病毒属于黄病毒科黄病毒属，同种属病毒有登革热病毒，黄热病毒，西尼罗河病毒等危害人体健康的病毒，不排除鸭坦布苏病毒感染哺乳动物并引发疾病的可能性。因此目前该病已经成为严重影响养鸭场生产性能的重大疫病之一。

卵黄抗体(IgY)是母禽被外来抗原刺激后，母禽血液中免疫球蛋白转移至其卵黄中对子代产生保护性作用的免疫球蛋白，是在卵黄内所产生的特异性抗体，其浓度远高于血清，并具有高度稳定性和生物学活性，这使应用卵黄抗体防病治病成为可能。

如CN 102793923A公开了一种鸭坦布苏病毒病免疫治疗制剂，其含有抗鸭坦布苏病毒高免卵黄抗体，按照下述步骤制备而成：1)蛋鸭开产前高免：对蛋鸭群开产前进行鸭坦布苏病毒病高强度免疫2)采集高免鸭蛋：采集经高免的蛋鸭群开产一个月内的初产蛋；3)清洁消毒：将采集的高免鸭蛋清洁后，用质量百分比浓度为0.5％的新洁尔灭溶液浸泡消毒20min，晾干；4)分离卵黄：在无菌条件下，打破蛋壳倒净蛋清，把蛋黄倒入消毒好的大烧杯内；5)蛋黄匀浆：在无菌条件下，将蛋黄置于消毒好的捣碎机内，加入一定比例的生理盐水进行匀浆，所述生理盐水为与所述卵黄等体积质量浓度为0.85％的氯化钠溶液；6)防腐抑菌：在无菌条件下，匀浆后的卵黄加入质量百分比浓度为0.01％的硫柳汞溶液或每毫升卵黄液加入青霉素、链霉素各一千单位进行防腐抑菌；7)封装保存：在无菌条件下，将所述步骤6)中经防腐抑菌的卵黄液摇匀后分装于消毒好的瓶中，冻结保存待用，保存温度为4-8℃或-20℃。其中卵黄抗体未经精制，如此类粗制抗体中含有大量的脂蛋白及卵磷脂等大分子物质，这些物质没有任何治疗作用且体积大，粘稠度高，注射困难且难以吸收，注射后对机体的应激大，易造成过敏反应，是外源性致热原。注射后易造成注射部位局部组织出血、肿胀、坏死，坏死的组织会导致机体发热，而发热会造成机体神经调节、体液调节等功能的紊乱，从而导致发病群体采食量减少，抵抗力下降，继发其他疾病。另外一方面，卵黄抗体中存在的不饱和脂肪酸和磷脂类十分容易氧化变质，从而使卵黄抗体的保存期大大缩短，需添加硫柳汞、青、链霉素等来延长其保质期，增加所谓的使用“安全性”，但结果往往是造成更大的应激和严重的药物残留。而且因此，建立一种可大量生产、产品纯度和活性高的提纯方法对卵黄抗体的广泛应用将具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种纯度、收率高，活性强、易于制备与应用且经济的鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明公开一种鸭坦布苏病毒卵黄抗体的制备方法，其包括以下步骤：

(1)利用鸭坦布苏病毒灭活疫苗免疫育龄母鸡，获得高免鸡蛋；

(2)收集高免鸡蛋蛋黄，去除卵黄膜和系带后利用胶体磨进行破碎，得蛋黄液；

(3)将步骤(2)得到的蛋黄液与纯化水以1:1～3的体积比混合，搅拌均匀后加入终浓度重量体积比为0.5～2％的柠檬酸及1～4％的聚阴离子纤维素，充分搅拌后，1～5℃放置3～6h，1～5℃离心；

(4)将步骤(3)收集的上清液过滤除菌后即得卵黄抗体液。