[发明专利]定向诱导细胞分化的小分子组合物及视网膜色素上皮细胞的制备方法

权利要求书

1.一种视网膜色素上皮细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取市购的人类胚胎干细胞H1细胞株活化培养并传代，集落融合至60%～70%时去除培养液内的bFGF，且每隔1～3天换培养液一次，直至培养形成色素团/色素灶后，再将色素团/色素灶移至铺有基质胶的培养皿，添加视网膜色素上皮细胞培养基进行诱导分化培养；

（2）在诱导分化培养的第1～10天内向培养基中加入尼克酰胺，且使其在培养基中的浓度达到5～50ng/ml，每隔1～3天换一次培养基；

（3）从诱导分化培养的第11天起，向培养基中加入含尼克酰胺5～50ng/ml、姜黄素0.5～10μM的定向诱导细胞分化的小分子组合物继续培养，每隔1～3天换一次培养基，持续培养至第30～40天，即获得成熟的视网膜色素上皮细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，所述培养液为mTeSR1培养基。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，视网膜色素上皮细胞培养基的制备方法如下：

在Knock out DMEM培养基中加入10%的KSR、1%的L-Glu、1%的NEAA、1%的PS双抗、0.1mM的β-巯基乙醇。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（1）中，诱导分化培养于37℃、5% CO₂条件下的细胞培养箱内进行。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，尼克酰胺在培养基中的浓度为10ng/mL。

6.根据权利要求1或5所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，加入所述定向诱导细胞分化的小分子组合物后，使培养基中含尼克酰胺10ng/mL、姜黄素1μM。