[发明专利]一种用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群及其制备方法

说明书

本发明提供了一种用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群，其为CD137⁺CD3⁺CD8⁺CD45RO⁺T细胞亚群。本发明还提供了上述细胞亚群的制备方法，先利用特异性标记物标记肿瘤组织中的T细胞亚群，然后经流式分选CD137⁺CD3⁺CD8⁺CD45RO⁺T细胞亚群，再进行体外扩增培养，获得用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群。本发明的细胞亚群具有更强的肿瘤杀伤效果、抗凋亡能力和增殖能力，能够在体内长期存活，旨在为肝癌的免疫治疗尤其是肿瘤浸润的T细胞免疫疗法提供有效候选细胞群，并为其他肿瘤的治疗提供新思路。

技术领域

本发明属于生物学领域，涉及一种免疫细胞，具体来说是一种用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群及其制备方法。

背景技术

免疫疗法是指通过激活免疫系统来治疗疾病。在肿瘤治疗中，CAR-T疗法是使用较为广泛的免疫疗法。传统CAR-T疗法通过嵌合抗原受体改造PBMC细胞，提高T细胞对目的细胞的识别能力，经过体外大量扩增CAR-T细胞后回输到病人体内。此方法在实体肿瘤和血液肿瘤治疗中都取得过显著的疗效，但是治疗效果受个体差异影响大，仅在部分患者人群中有明显效果，整体治疗响应率不高。其原因主要有两点：若CAR-T的肿瘤特异性识别能力不高，容易发生脱靶效应；另外，第一代CAR-T方法改造的T细胞在回输到体内后，增殖和生存能力减弱，导致T细胞凋亡。随后的第二代CAR-T增加了共刺激信号，如CD28、4-1BB等，旨在增强T细胞分泌细胞因子、抗凋亡和增殖的能力。但目前为止，如何增强并保持T细胞的上述功能依然是CAR-T治疗的重点问题。

除了PBMC细胞，肿瘤浸润的淋巴细胞(Tumor Infiltrating Lymphocyte，TIL)也是免疫治疗的研究热点。近年来，许多研究证明，肿瘤组织周围特异性的TIL的存在和病人良好的预后相关。目前的TIL治疗步骤包括了分离，筛选，扩增，回输4个阶段，从病人肿瘤组织中提取出的淋巴细胞加入高浓度的IL-2进行培养，筛选肿瘤特异性TIL，再进行扩增，大大提高了TIL治疗肿瘤疾病的有效性。TIL治疗方法也存在局限性：第一，TIL制备技术复杂，需要进行大量筛选；第二，目前的TIL治疗方法采用的是效应T细胞(effector T cell),细胞寿命短，在体内无法维持长期生存。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种用于免疫治疗的细胞及其制备方法，所述的这种用于免疫治疗的细胞及其制备方法要解决现有技术中采用免疫技术治疗肿瘤疾病的效果不佳的技术问题。

本发明提供了一种用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群，其为 CD137⁺CD3⁺CD8⁺CD45RO⁺T细胞亚群。

本发明还提供了上述用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群的制备方法，先利用特异性标记物标记肿瘤组织中的T细胞亚群，经流式分选CD137⁺CD3⁺CD8⁺CD45RO⁺T细胞亚群，再进行体外扩增培养，获得用于免疫治疗原发性肝细胞肝癌的细胞亚群。

进一步的，所述特异性标志物为CD137、CD3、CD8和CD45RO。

本发明还提供了CD8⁺T细胞的CD137作为原发性肝细胞肝癌肿瘤反应性T细胞标记物的用途。

本发明先利用特异性标记物标记肿瘤组织中的T细胞亚群，所述特异性标志物包括 CD137(TNFRSF9/4-1BB)，CD3,CD8,CD45RO，然后经流式分选CD137⁺CD3⁺CD8⁺CD45RO⁺T细胞亚群，并进行体外扩增，作为肿瘤浸润的T细胞免疫疗法的新方案。