[发明专利]生物样本处理方法、生物样本的亚铁离子或总铁离子测定方法及检测试剂盒

说明书

本申请提供一种生物样本处理方法、生物样本的亚铁离子或总铁离子测定方法及检测试剂盒。上述生物样本处理方法，酸性溶液通过低渗透原理既可以将细胞充分涨裂，同时也可以使细胞内的铁离子在酸的作用下充分释放，并且不与显色剂发生其它反应，不影响对铁离子的测量。上述生物样本的亚铁离子测定方法和生物样本的总铁离子测定方法，通过提高了还原剂的浓度，使铁离子充分还原，通过增加了碱液，使得三吡啶基三嗪和溶液中的亚铁离子生成稳定的蓝紫色络合物，可用于亚铁离子的检测，简单易行且较为准确。上述亚铁离子和总铁离子检测试剂盒，可用于生物样本中亚铁离子和总铁离子的测定。

技术领域

本发明涉及生物样本检测技术领域，尤其涉及一种生物样本处理方法、生物样本的亚铁离子测定方法、生物样本的总铁离子测定方法、生物样本的亚铁离子检测试剂盒以及生物样本的总铁离子检测试剂盒。

背景技术

生物体内有许多微量的金属元素参与不同的生理代谢活动。铁是一种矿物质，在DNA合成、电子转移和氧运输等许多生物过程中发挥着至关重要的作用。铁是一种过渡元素，可形成一系列氧化态，最常见的是二价铁(Fe²⁺或亚铁)和三价铁(Fe³⁺)。含铁蛋白参与许多反应，通常利用铁的氧化态的瞬时变化进行化学反应。铁元素的缺少和过量都可能引起严重的人体机能障碍。因此，在临床、药物和环境等方面找到合适的铁离子定量检测方法一直都是科研工作者努力的方向。

目前，对于铁元素定量分析主要集中在土壤，水质及大气等，常用的方法有原子吸收法、电感耦合等离子体发射光谱法、荧光探针法及分光光度法。前两者尽管测定精确，但是对设备要求较高，测定仪器较为昂贵，操作较为繁琐，对于普通实验室较难应用。荧光探针法尚处于研究探索阶段，未普及应用。分光光度法对设备、试剂及操作要求相对简单，且较为成熟，目前应用较为广泛。常用的分光光度法包括2,4,6-三吡啶基三嗪显色分光光度法、磺基水杨酸分光光度法、邻菲罗啉分光光度法。

目前以上三种分光光度法针对测量对象主要是水样，土壤等环境学样本。存在样品需要量大，实验体系较大(至少是50mL样本)，而生物学实验样本主要包括细胞、组织和血液样本等，样本量有限，且生物样本pH值与环境样本pH值范围不同，应用于环境样本实验体系的pH值要求也不适用于生物生命科学实验。此外，细胞及组织裂解液和上述方法的显色剂发生反应干扰实验结果。目前生物研究中针对生物样本的铁离子检测试剂盒均为国外进口，价格昂贵，且试剂盒成分保密。若能发明出简单可行的拥有我国自主知识产权的生物样本铁离子检测试剂盒则填补了市场的空白，为我国的科研领域做出贡献。

传统的生物样本的处理方法中，通常使得细胞内容物释放的方法为裂解细胞，目前市场有通用的细胞裂解液与三吡啶基三嗪作用后生成乳白色沉淀，不能用于铁离子的测定。利用渗透压梯度，将生物样本置于双蒸水中，将细胞涨裂，但铁离子大多与蛋白,DNA或RNA结合，很难释放，经双蒸水涨裂的细胞所释放的内容物无法和三吡啶基三嗪反应生成络合物。因此，如何将生物样本妥善处理，使得样本的铁元素能够准确检测，以及如何能够有效的测定生物样本中的铁元素都是需要攻克的问题。

发明内容

鉴于此，有必要提供一种能够准确进行生物样本的铁元素检测的一种生物样本处理方法、生物样本的亚铁离子测定方法、生物样本的总铁离子测定方法、生物样本的亚铁离子检测试剂盒以及生物样本的总铁离子检测试剂盒。

一种生物样本处理方法，包括以下步骤：

将生物样品加入酸性溶液中，得到生物样品溶液；

采用超声震荡或超声破碎的方法对所述生物样品溶液进行处理，得到混合液；

将所述混合液离心，弃去沉淀，留取上清液，得到处理后的生物样品溶液。

在一个实施例中，所述将生物样品加入酸性溶液中，得到生物样品溶液的操作为：