[发明专利]一种蝉蜕中乙酰多巴胺的定性检测方法

说明书

本发明公开了一种蝉蜕中乙酰多巴胺的定性检测方法，该方法包括供试品溶液的制备和超高效液相色谱仪进行定性分析，一共鉴定出31种乙酰多巴胺。本发明通过大量实验筛选，采用超高效液相色谱质谱联用进行定性分析，该定性检测方法可以同时定性分析31种不同的乙酰多巴胺化合物。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价蝉蜕药材的质量，对控制其质量和保证疗效具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种中药材的质量定性检测方法，具体涉及蝉蜕中乙酰多巴胺的定性检测方法。

背景技术

蝉蜕来源于蝉科昆虫黑蚱Cryptotympana pustulata Fabricius的若虫羽化时脱落的皮壳，性味甘，寒，归肺、肝经。具有散风除热，利咽，透疹，退翳，解痉功效。可用于风热感冒，咽痛，音哑，麻疹不透，风疹瘙痒，目赤翳障，惊风抽搐，破伤风。

蝉蜕药材含、蛋白质、氨基酸和乙酰多巴胺二聚体、三聚体、四聚体、五聚体。市场上的蝉蜕品种混乱，目前关于蝉蜕中的有效成分乙酰多巴胺仅仅只有3 种成分的检测，未能全面、客观的对蝉蜕进行检测分析，未能严控把关蝉蜕的质量。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，采用超高效液相色谱联用质谱对蝉蜕进行定性分析检测。本发明通过大量实验筛选流动相组成，洗脱方式，质谱检测条件等关键色谱条件。该定性检测方法可以同时检测蝉蜕中的乙酰多巴胺二聚体、三聚体、四聚体、五聚体共31个不同的化合物，其中可定性鉴别乙酰多巴胺二聚体4种同分异构体，乙酰多巴胺三聚体11 种同分异构体，乙酰多巴胺四聚体10种同分异构体，乙酰多巴胺五聚体6种同分异构体。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价蝉蜕药材的质量，对控制质量和保证疗效具有重要意义。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种蝉蜕中乙酰多巴胺的定性检测方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备

精密称取蝉蜕药材，加入8倍量的乙醇，超声提取2次，每次30分钟，过滤，合并二次提取的滤液，减压浓缩，续滤液过0.22μm滤膜，得供试品溶液；

(2)定性分析检测

取步骤(1)的蝉蜕供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行定性分析，鉴定出31种乙酰多巴胺；其中乙酰多巴胺二聚体4种，乙酰多巴胺三聚体11种，乙酰多巴胺四聚体10种，乙酰多巴胺五聚体6种。

以上的蝉蜕中乙酰多巴胺的定性检测方法，步骤(2)色谱条件为：仪器为 WatersACQUITY UPLC，二极管矩阵检测器；自动进样器；ACQUITY HSS C18 column；流动相为0.1％冰醋酸-水为流动相A相和乙腈为流动相B相；流速0.5 mL/min；Acquity UPLC BEH C₁₈(2.1mm×100mm,1.7μm色谱柱)，柱温35℃；进样量1μL；洗脱梯度为：0-5min，10-55％B；5-7min，55-95％B；

质谱条件为：电喷雾离子源；离子范围m/z 50～2000；碰撞气为氦气；辅助气体和屏蔽气体为氮气；喷雾电压：3.0kV；离子源温度500.0℃；辅助气和喷雾气压40.0psi；裂解电压：40V；MS碰撞能：6eV；MS/MS碰撞能：20-60V，采用MassLynx软件，版本4.1,Waters,美国，得到化合物的保留时间、母离子、碎片离子信息。

作为优选方案，以上所述的蝉蜕中乙酰多巴胺的定性检测方法，定性鉴别 31种乙酰多巴胺化合物的信息如下：

色谱条件的优化