[发明专利]一种脂肪细胞的染色方法及其应用

权利要求书

1.一种脂肪组织染色方法，所述染色方法包括如下步骤：

a.用TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片；

b.除去所述TritonX-100；

c.用戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片；

d.用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片；

e.对所述脂肪组织冷冻切片脱色；

f.用DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片；

g.除去DMSO；

h.用考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片；

i.脱色。

2.如权利要求1所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：

在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片；

所述脂肪组织冷冻切片厚度30-40μm；

在步骤a中，用0.8-1.2％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片15-25min；

在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100，其中，M缓冲液包含咪唑50mmol/L、KCl50mmol/L、MgCl₂·6H₂O 0.5mmol/L、EGTA 1.0mmol/L、EDTA·2H₂O 0.1mmol/L、B-巯基乙醇1.0mmol/L、甘油4.0mmol/L，M缓冲液的pH为7.2；

在步骤b中，用M缓冲液洗1-3次，每次3-6min；

在步骤c中，用2.5-3.5％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片20-40min；

在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片8-12min；

在步骤e中，用异丙醇对所述脂肪组织冷冻切片脱色；

所述异丙醇的浓度为55-65％，处理时间为冲洗至洗去浮色；

在步骤f中，用45-55％％DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片5-10分钟；

在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗除去DMSO；

在步骤h中，用0.15-0.25％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片25-35min；

在步骤i中，蒸馏水洗脱色。

3.如权利要求2所述的脂肪组织染色方法，其特征在于：

在步骤a之前，用磷酸缓冲液漂洗所述脂肪组织冷冻切片三次，每次一分钟；

所述脂肪组织冷冻切片厚度35μm；

在步骤a中，用1％TritonX-100处理脂肪组织冷冻切片20min；

在步骤b中，用M缓冲液除去所述TritonX-100三次，每次5min；

在步骤b中，用M缓冲液洗三次，每次5min；

在步骤c中，用3％戊二醛固定所述脂肪组织冷冻切片30min；

在步骤d中，用油红O染色所述脂肪组织冷冻切片10min；

在步骤f中，用50％的DMSO处理所述脂肪组织冷冻切片8分钟；

在步骤g中，用磷酸缓冲液漂洗一次除去DMSO；

在步骤h中，用0.2％考马斯亮蓝R250染色所述脂肪组织冷冻切片30min；

在步骤i中，蒸馏水洗两次脱色；

在步骤i后，将样品置于载玻片上加盖玻片。

4.一种用于脂肪组织染色的试剂盒，所述试剂盒包括：

用于盛装或盛装有磷酸缓冲液的试剂瓶；

用于盛装或盛装有TritonX-100的试剂瓶；

用于盛装或盛装有M缓冲液的试剂瓶，其中，M缓冲液包含咪唑50mmol/L、KCl 50mmol/L、MgCl₂·6H₂O 0.5mmol/L、EGTA 1.0mmol/L、EDTA·2H₂O 0.1mmol/L、B-巯基乙醇1.0mmol/L、甘油4.0mmol/L，M缓冲液的pH为7.2；

用于盛装或盛装有戊二醛的试剂瓶；

用于盛装或盛装有油红O的试剂瓶；

用于盛装或盛装有异丙醇的试剂瓶；

用于盛装或盛装有DMSO的试剂瓶；

用于盛装或盛装有考马斯亮蓝R250的试剂瓶；

用于盛装或盛装有蒸馏水的试剂瓶；

载玻片；

盖玻片；

所述试剂盒用于权利要求1-3中任一项所述的脂肪组织染色方法。