[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌及其胞外多糖的制备方法

权利要求书

1.一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在，所述菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）DMBA-K4，已于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，保藏编号为GDMCC NO: 60644。

2.一种解淀粉芽孢杆菌胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）菌种活化：将权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4活化后得到种子发酵液，该种子发酵液的菌含量为10⁸~10⁹CFU/mL；

（2）扩大培养：将上述种子发酵液按体积比3±1：100接入扩大培养基中，摇床上培养，得到解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液；所述扩大培养基的pH为7.5±0.5，碳源为蔗糖，氮源为质量比为1:（1~2）的胰蛋白胨+酵母提取物；

（3）除菌体：将解淀粉芽孢杆菌DMBA-K4发酵液离心，除去沉淀菌体，保留上清液；

（4）醇沉：向上清液加入乙醇，静置，离心，倾去上清液，沉淀用适量蒸馏水溶解后，置于透析袋中透析；

（5）除蛋白：向步骤（4）中所得的液体加入sevage试剂，室温下置于摇床振荡，使蛋白吸附在有机相中，然后离心，保留水相，重复操作，直至蛋白完全除去。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，按质量体积比（w/v）计，所述的扩大培养基的配方为：氯化钠0.4~0.6%，酵母提取物0.7~0.8%，胰蛋白胨0.7~0.8%，蔗糖0.3~0.5%，余量为水。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的扩大培养基于0.08~0.10MPa灭菌15~20min，冷却至36~38℃。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，摇床转速为150~180r/min，温度为28~32℃，时间为12±4h。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（3）和（4）中，离心时间是15~20min，离心温度为4℃，转速为10000rpm/min；步骤（5）离心条件为4000×g离心1min。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，乙醇浓度为95%，按体积比，乙醇：上清液=3:1，4℃静置24h。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，透析的时间为24~48h。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（5）中，按体积比，sevage试剂：透析液=1:4，其中sevage试剂为氯仿：正丁醇=4:1。

10.权利要求2~9任一项所述的方法制备的解淀粉芽孢杆菌胞外多糖。