[发明专利]一种指导微生物配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法

说明书

本发明公开了一种指导微生物的配伍的“相似相容”原则及其微生物的配伍的“相似相容”原则以及提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法。本发明提出的“相似相容”配伍方法如下：首先是对目标环境中的群落结构进行解析，筛选出其中的主要优势种群；然后结合生物激活的分析结果，筛选出相对丰度明显增长、即竞争占优势的细菌类群；最后以16SrDNA序列为参照，从菌株资源库中筛选若干同时具有较强功能、又与目标本源优势种群或激活中竞争优势种群系统发育相似的菌株进行配伍，然后将这些微生物培养后混合投加到目标环境中。本发明对于石油污染治理有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种指导微生物配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法。

背景技术

微生物在自然界中不是以个体，而是以群落的形式存在的。自然环境，包括土壤环境(动物、微生物共存)、水环境(动物、植物、微生物共存)和油藏环境(油层环境本身就很复杂，同时原油本身也是由烷烃、芳香烃、非烃和沥青质组成的混合物)等都具有复杂多样的特点。在这些环境中单一种类的微生物很难适应。同时，由于微生物对碳源的选择有着很强的偏好性，单一微生物难以对于复杂的有机混合污染物进行高效稳定地降解。对外源投加的微生物尤其如此。只有外源微生物在目标环境稳定生存并且与同内源微生物竞争中取得优势才能高效、稳定长久地发挥作用。在外源投加微生物时，通常认为多种微生物的作用要优于投加单一微生物。在选择和投加多种微生物时，需要考虑这些微生物的配伍性：只有很好配伍的微生物才能更好地发挥作用。目前，通常采用的配伍方法是将微生物菌株进行随机组合，对于菌株的筛选和组合完全是一个随机的过程，忽略了外源微生物之间的功能关系以及它们与目标环境中内源微生物可能存在的拮抗作用。

发明内容

本发明的目的是提供一种指导微生物的配伍的“相似相容”原则及其提高外源投加微生物功能与效率的配伍方法。

本发明首先提供了用于降解目标土壤中原油的菌株组合配伍方法，包括如下步骤：

(a1)参照方法A和方法B筛选菌株；

(a2)将1-3种方法A筛选的菌株和1-3种方法B筛选的菌株进行组合，得到用于降解目标土壤中原油的菌株组合；

方法A包括如下步骤：从候选菌株中筛选与目标土壤中优势菌种相似度大于88％的菌株；

方法B包括如下步骤：从候选菌株中筛选与经过生物激活的目标土壤中竞争优势菌种相似度大于88％的菌株；

所述候选菌株为具有原油利用能力的菌株。

在本发明的实施例中，从方法A中选择2种菌株，从方法B中选择3种菌株进行混合。

所述方法A和方法B中，筛选的菌株可为在满足相似度的情况下原油利用能力最强的菌株。

方法A包括如下(b1)-(b3)所述的步骤：

(b1)利用T-RFLP分析目标土壤中微生物菌落结构，筛选丰度最高的n种T-RFs；

(b2)获得步骤(b1)筛选的n种T-RFs代表的细菌16S rDNA作为参照序列；

(b3)在候选菌株中筛选16S rDNA与步骤(a2)中的任一种参照序列相似度大于88％的菌株；

方法B包括如下(c1)-(c3)所示的步骤：

(c1)利用T-RFLP分析经过生物激活的目标土壤中微生物菌落结构，筛选激活前后丰度增长最多的n种T-RFs；

(c2)获得步骤(c1)筛选的n种T-RFs对应的细菌16S rDNA作为参照序列；

(c3)在候选菌株中筛选16S rDNA与步骤(a2)中的任一种参照序列相似度大于88％的菌株；